胃蛋白酶試劑盒公司正*的產(chǎn)品：625-71-83-羥基丁石蠟切片組織IGF 蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒
94-62-2標(biāo)準(zhǔn)品載玻片細(xì)胞IGF 蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒
牛細(xì)小病毒探針?lè)晒舛縋CR試劑盒冰凍切片組織IGF 蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒
雜交瘤細(xì)胞；1D9石蠟切片組織IGF 蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒

公司產(chǎn)品僅用于科研產(chǎn)品屬性：

自備儀器和用品：

酶標(biāo)儀、離心機(jī)、移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水

粗酶液提取：

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

 

測(cè)定步驟：

1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。

2、 試劑三的稀釋：將試劑三用蒸餾水稀釋50倍，用多少配多少。（試劑三和蒸餾水1：49稀釋。

3、 工作液配制：在試劑一加入100μl試劑二，充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。（若一次性測(cè)定樣本較少，可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml：0.1ml的比例混勻配制）

4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解（溶解后一周內(nèi)用完）。

5、 樣本測(cè)定

注意事項(xiàng)

1、試劑三為酶，不可冷凍，使用時(shí)在冰上放置。

2、對(duì)照管只需要做一管。

3、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管，對(duì)照管數(shù)值在什么范圍？

對(duì)照管的范圍是0.4-1。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是（1）試劑三活性低，可以適當(dāng)減少稀釋倍數(shù)；（2)沒(méi)有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時(shí)間不夠，可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間（反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min）。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑三未按操作說(shuō)明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。

若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè)，通常可以使測(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

豬血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)試劑盒肌激（兔肌）L-亮氨酯鹽鹽 98%春雷霉素鹽鹽 分析標(biāo)準(zhǔn)品，95%

豬黑色素瘤轉(zhuǎn)移表面黏附分子(MMSAM)試劑盒心肌黃D-賴氨鹽鹽 98%標(biāo)準(zhǔn)溶液100μg/ml,u=4%,溶劑:乙

豬黑色素瘤轉(zhuǎn)移表面黏附分子(MMSAM)試劑盒G-6-P脫氫D-亮氨 99%標(biāo)準(zhǔn)溶液10μg/ml,u=4%,溶劑:乙

豬可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2(VEGFR-2/sFLK-1)試劑盒G-6-P脫氫N(e)-Boc-L-賴氨 97%乳氟禾草靈 分析標(biāo)準(zhǔn)品，74%

豬可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2(VEGFR-2/sFLK-1)試劑盒G-6-P脫氫亮抑酞 ≥90% (HPLC虱螨脲 分析標(biāo)準(zhǔn)品，99.5%

豬血管內(nèi)皮鈣粘著蛋白復(fù)合體(VE-cad)試劑盒G-6-P脫氫L-亮氨芐酯對(duì)苯磺鹽 98%紫精 分析標(biāo)準(zhǔn)品，99%

豬血管內(nèi)皮鈣粘著蛋白復(fù)合體(VE-cad)試劑盒磷葡萄糖異構(gòu)D-亮氨酯鹽鹽 98%苯噻草 分析標(biāo)準(zhǔn)品，98.5%

豬去上腺素(NE)試劑盒磷葡萄糖變位D-亮氨芐酯對(duì)苯磺鹽 98%磺隆 分析標(biāo)準(zhǔn)品，98%

豬去上腺素(NE)試劑盒磷葡萄糖變位Boc-Lys(Boc)-ONp 97%磺隆標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=2%,溶劑:

豬血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)試劑盒 蚯蚓Boc-Lys(Z)-OSu 98%磺隆標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=4%

豬血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)試劑盒 蚯蚓N-(叔丁氧羰)-D-賴氨  98%四聚乙 分析標(biāo)準(zhǔn)品，97%

豬凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)試劑盒 離析R-10N-[(9H-芴-9-氧)羰]-N'-[(2-烯氧)羰]-L-賴氨  95%異草 分析標(biāo)準(zhǔn)品，98.5%

豬凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)試劑盒 離析R-10N-芴氧羰-N'-[1-(4,4-二-2,6-二氧代環(huán)己亞)-3-霜靈 分析標(biāo)準(zhǔn)品，98%

豬B淋巴瘤因子2(Bcl-2)試劑盒離析R-10Z-丁氧羰賴氨 98%霜靈標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=5%

豬B淋巴瘤因子2(Bcl-2)試劑盒蝸牛H-Leu-2-Chlorotrityl Resin 0.3~0.8 mmol/g, 100~200 mesh霜靈標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=6%

豬Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)試劑盒 蝸牛H-Lys(Boc)-2-Chlorotrityl Resin 0.3~0.8 mmol/g, 100~200 mesh氧蟲酰肼 分析標(biāo)準(zhǔn)品，98%
胃蛋白酶試劑盒γ-氨吡啶

γ-乙吡啶

胞啶

苯并嘧啶

脫氧脲啶

二苯并吡啶

核糖胸腺嘧啶

氧芐氨嘧啶

鄰二吡啶

操作步驟：

1. 樣品的準(zhǔn)備：

a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：收集細(xì)胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見(jiàn)電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測(cè)樣品。

b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見(jiàn)電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測(cè)樣品。

c. 使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測(cè)。

d. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測(cè)定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測(cè)定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測(cè)定。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：

a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測(cè)樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測(cè)緩沖液的比例進(jìn)行稀釋，即為反應(yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測(cè)中可以各取20微升，參考樣品進(jìn)行檢測(cè)。說(shuō)明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對(duì)于SOD的檢測(cè)并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽(yáng)性對(duì)照或作為對(duì)SOD活性定量的參考。

3. 樣品測(cè)定：

a. 參考下表使用96孔板加入各個(gè)組分，注意設(shè)置樣品孔和各種空白對(duì)照孔。

注意：加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液后反應(yīng)即會(huì)開始，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液的時(shí)間先后差異而導(dǎo)致的誤差。

b. 37℃孵育30分鐘。

說(shuō)明：孵育25至35分鐘檢測(cè)出來(lái)的SOD活力無(wú)顯著差異，但為保證檢測(cè)結(jié)果的一致性，推薦孵育30分鐘。

c. 450nm 測(cè)定吸光度。如無(wú)450nm 濾光片，可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長(zhǎng)作為參考波長(zhǎng)進(jìn)行雙波長(zhǎng)測(cè)定。

4. 樣品中總SOD活力的計(jì)算：

a. 抑制百分率的計(jì)算：

參考如下計(jì)算公式計(jì)算抑制百分率：

抑制百分率＝[(A空白對(duì)照1－A空白對(duì)照2)－(A樣品－A空白對(duì)照3)] / (A空白對(duì)照1－A空白對(duì)照2) × *

如果沒(méi)有設(shè)置空白對(duì)照3，則可以把計(jì)算公式簡(jiǎn)化為：

抑制百分率＝(A空白對(duì)照1－A樣品) / (A空白對(duì)照1－A空白對(duì)照2) × *

如果計(jì)算出來(lái)的抑制百分率小于30% 或大于70% ，則通常需要把該樣品重新測(cè)定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測(cè)定出來(lái)的抑制百分率偏高，則需適當(dāng)稀釋樣品；如果測(cè)定出來(lái)的抑制百分率偏低，則需重新準(zhǔn)備濃度較高的待測(cè)樣品。

b. SOD酶活力單位的定義：在上述化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為50% 時(shí)，反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個(gè)酶活力單位 (unit)。注意：SOD的活力單位的定義方式有很多種，不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進(jìn)行適當(dāng)換算。