自備儀器和用品：

酶標儀、離心機、移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水

公司產品僅用于科研產品屬性：

粗酶液提取：

1、細菌、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1、 酶標儀預熱30min以上，調節波長至450nm。

2、 試劑三的稀釋：將試劑三用蒸餾水稀釋50倍，用多少配多少。（試劑三和蒸餾水1：49稀釋。

3、 工作液配制：在試劑一加入100μl試劑二，充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。（若一次性測定樣本較少，可按照實際用量將試劑一和試劑二按照20ml：0.1ml的比例混勻配制）

4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解（溶解后一周內用完）。

5、 樣本測定

注意事項

1、試劑三為酶，不可冷凍，使用時在冰上放置。

2、對照管只需要做一管。

3、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管，對照管數值在什么范圍？

對照管的范圍是0.4-1。對照管吸光值過低可能是（1）試劑三活性低，可以適當減少稀釋倍數；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應時間不夠，可以延長反應時間（反應時間30min可以延長到40min）。對照管吸光值過高可能是試劑三未按操作說明書稀釋相應倍數。

若出現測定管大于對照管，可能是樣本中雜質的影響太大，為了降低雜質的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測，通常可以使測定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數。

操作步驟：

1. 樣品的準備：

a. 細胞樣品的準備：收集細胞，用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。

c. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經足夠用于后續檢測。

d. 根據蛋白濃度和預計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定，可以冰浴保存；如果當天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當天完成測定。

2. 試劑盒的準備工作：

a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據待檢測樣品(包括標準品) 數量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現配現用。

注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當混勻后再使用。

b. 反應啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋，即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現配現用。

c. (可選做) SOD 標準品準備：需自備SOD標準品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標準品宜現稀釋現使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品，但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

3. 樣品測定：

a. 參考下表使用96孔板加入各個組分，注意設置樣品孔和各種空白對照孔。

注意：加入反應啟動工作液后反應即會開始，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應啟動工作液的時間先后差異而導致的誤差。

b. 37℃孵育30分鐘。

說明：孵育25至35分鐘檢測出來的SOD活力無顯著差異，但為保證檢測結果的一致性，推薦孵育30分鐘。

c. 450nm 測定吸光度。如無450nm 濾光片，可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長作為參考波長進行雙波長測定。

4. 樣品中總SOD活力的計算：

a. 抑制百分率的計算：

參考如下計算公式計算抑制百分率：

抑制百分率＝[(A空白對照1－A空白對照2)－(A樣品－A空白對照3)] / (A空白對照1－A空白對照2) × *

如果沒有設置空白對照3，則可以把計算公式簡化為：

抑制百分率＝(A空白對照1－A樣品) / (A空白對照1－A空白對照2) × *

如果計算出來的抑制百分率小于30% 或大于70% ，則通常需要把該樣品重新測定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內。如果測定出來的抑制百分率偏高，則需適當稀釋樣品；如果測定出來的抑制百分率偏低，則需重新準備濃度較高的待測樣品。

b. SOD酶活力單位的定義：在上述化酶藕聯反應體系中抑制百分率為50% 時，反應體系中的SOD酶活力定義為一個酶活力單位 (unit)。注意：SOD的活力單位的定義方式有很多種，不同的活力單位需根據其定義的不同進行適當換算。

心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)試劑盒大豆甾B對壬酚 分析標準品，異構體混合物乙(95%) CP,95.0%

心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)試劑盒大果桉 A對壬酚 分析標準品,純品乙(95%)  for HPLC

血管生成素受體/含免疫球蛋白樣環和上皮生長因子樣域酪氨激1(Tie1)試劑盒大果桉 C正 AR,97%乙(95%) GR,95.0%        

血管生成素受體/含免疫球蛋白樣環和上皮生長因子樣域酪氨激1(Tie1)試劑盒大果桉 E正 CP,95%乙(95%)  ACS

血管生成素2(ANG-2)試劑盒大果桉 H正 Standard for GC，>99%(GC)95%藥用酒精 藥用級

血管生成素2(ANG-2)試劑盒大果桉 I乙正酯 AR,99.0% 95%乙 光譜純

血管生成素1(ANG-1)試劑盒大果桉 J醋酯 99%高哌 98%

血管生成素1(ANG-1)試劑盒大果桉 K乙二  99.4%2-吡啶 98%

血管生長素(ANG)試劑盒大果桉 L正 CP,98.5% 乙黃原 AR，95%

血管生長素(ANG)試劑盒大果桉 N聚乙烯吡咯烷 平均分子量 8000, K16-18乙黃原 98%

血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)試劑盒二三乙烯 CP,98.5%2-氨嘧啶 98%

血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)試劑盒二酚1,2,3,4-四氫萘 CP2-(3-苯氧) 98%

帕金森氏病2Parkin(Park2)試劑盒螺1,2,3,4-四氫萘 AR，97%1-酰哌啶 99%

帕金森氏病2Parkin(Park2)試劑盒色原烯1,2,3,4-四氫萘 Standard for GC, ≥99.5% (GC)3-吡啶 98%

紐蛋白(VCL)試劑盒烯1,2,3,4-四氫萘  >98.5%(GC)反-玉米素 98%

紐蛋白(VCL)試劑盒酰 F1,2,3,4-四氫萘 分析標準品，≥99.5% (GC)偏釩銨 CP，98%
支鏈氨基酸轉氨酶(BCAT)活性測定試劑盒EGF應答因子1抗體抗體松馳素 E CYTOCHALASIN E(RG)(PLEASE CALL)Human, Mouse, Rat

化鋅指蛋白36抗體松馳素 D CYTOCHALASIN D(RG)Human, Mouse

鋅指蛋白347抗體松馳素 C CYTOCHALASIN C(RG)Human, Mouse, Rat

鋅指蛋白BED5抗體松弛素 B CYTOCHALASIN B(RG)(PLEASE CALL)Human, Mouse

鋅指蛋白704抗體松馳素 A CYTOCHALASIN A(RG)Human, Mouse, Rat

抑癌蛋白5/鋅指蛋白434抗體2-環己烷環己 CYCLOHEXYLCYCLOHEXANONE, 2-(SG)Human, Mouse, Rat

ZCWCC1抗體2-環己烷環己 CYCLOHEXYLCYCLOHEXANONE, 2-(SG)Human, Mouse

鋅指蛋白300抗體環己 CYCLOHEXANONE(SG)Human, Mouse

鋅指蛋白ZBTB39抗體薊苦素 CYNISIN(CNICIN)(RG)Human, Mouse