實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品名稱:脈絡(luò)膜成纖維細(xì)胞
產(chǎn)品規(guī)格:5×105
貨號(hào):BJ-01X1913
產(chǎn)品類(lèi)型:原代細(xì)胞
單位:T25/瓶
提供細(xì)胞鑒定:提供免疫熒光鑒定報(bào)告
保存培養(yǎng)溫度(℃):37
運(yùn)輸溫度(℃):常溫
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購(gòu)買(mǎi)到貨后,公司產(chǎn)品僅用于科研由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè),*進(jìn)口來(lái)源,*保證5代以內(nèi),活力>95%,無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
操作要點(diǎn):
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動(dòng)凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。
5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
大鼠多肽YY(PYY)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒二苯線狀氧化銅 CP硫磷標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.270mg/ml(劇品)
大鼠穿孔蛋白1(PRF1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒2-氟苯乙三 AR,99.0%(易制品)鉺標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mL,體:10%HCL
大鼠幽門(mén)螺旋菌IgM(Hp-IgM)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒2-氟苯乙三 CP,98.5%(劇品)乙苯標(biāo)準(zhǔn)溶液 1 mg/ml in methanol
大鼠過(guò)氧化物體膜蛋白3(PMP 3)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒2-氟苯乙三 for HPLC, ≥99.8%(劇品)乙二四乙二鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液0.05 M,溶劑:水
大鼠過(guò)氧化物體增殖因子活化受體γ( PPAR-γ)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒三氟乙酰三 ACS,≥99.8%(劇品)吸收峰波長(zhǎng)(nm):400.0~620.0,體:標(biāo)分析儀
大鼠過(guò)氧化物體增殖物激活受體α(PPAR-α)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒三氟乙酰三標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml,溶劑:吸光度:0.200~1.000A, 體: 標(biāo)分析儀
大鼠磷脂酰肌抗體IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒三氟乙酰三標(biāo)準(zhǔn)溶液 體:乙標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.80mg/mL,體:水
大鼠磷化蛋白激C(P-PKC)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒2-羥吡啶三 農(nóng)殘級(jí), ≥99.8%(劇品)銪標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000µg/mL in 10%HCL
大鼠磷化外信號(hào)調(diào)節(jié)激(pERK)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒2-羥吡啶三 Standard for GC乙二四乙(EDTA)二鈉純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 99.96%
大鼠磷化核因子κB抑制蛋白α(pIKBα)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒2-羥吡啶化亞銅 AR,97%乙汞標(biāo)準(zhǔn)溶液 75.3×10-6
大鼠磷脂酰肌3激2α(PI3K2α)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒2,4,6-三吡啶硫銅,五水 99.99% metals basis環(huán)氧烷標(biāo)準(zhǔn)溶液 997.8mg/L,溶劑:二
大鼠磷脂A1激活蛋白(PLAA)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒2,4,6-三吡啶硫銅,五水 培養(yǎng)級(jí), ≥98%檸檬黃標(biāo)準(zhǔn)溶液0.50mg/mL,溶劑:水
大鼠磷脂A1(PLA1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒2,4,6-三吡啶鈣 SU熒蒽標(biāo)準(zhǔn)溶液 10~100μg/mL,體:
大鼠磷脂C γ1(PLCg1)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒2-苯乙鈣 98%吡氟禾草靈標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.101mg/ml
大鼠磷脂C (PLC)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒3-苯式碳銅 AR,54-57% Cu basis氟硅唑標(biāo)準(zhǔn)溶液 1.00mg/ml
大鼠磷化乙酰輔A羧化(pACCase)聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒3-苯氧化銅 AR,99%仲丁威標(biāo)準(zhǔn)溶液 1.00mg/ml
脈絡(luò)膜成纖維細(xì)胞防御素α6抗體雙(標(biāo)準(zhǔn)品) Disulfiram
S期激活化蛋白DBF4B抗體雙水二氨環(huán)已烷鉑二硝鹽(奧沙利鉑雜質(zhì))(標(biāo)準(zhǔn)品) Disulfiram
脫氧胞苷激抗體水楊(標(biāo)準(zhǔn)品) Myricetin
短鏈脫氫還原3抗體水楊鎂(標(biāo)準(zhǔn)品) Myricetin
DNA聚合θ/DNA pol θ抗體水楊片(不含水楊對(duì)照品) Deoxycholic acid
DENN域內(nèi)含蛋白2D抗體水楊酰(標(biāo)準(zhǔn)品) β-Cyclodextrin
肌相關(guān)蛋白DAG1抗體順鉑(標(biāo)準(zhǔn)品) Ramipril
磷化肌相關(guān)蛋白DAG1抗體司帕沙星(標(biāo)準(zhǔn)品) Ramipril
磷化形態(tài)發(fā)生紊亂關(guān)聯(lián)激活因子1抗體司他夫定(標(biāo)準(zhǔn)品) *