詳細介紹
原理:
所謂實時熒光定量PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
檢測方法
1.SYBRGreenⅠ法:
在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,發射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。
SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法:
探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物的形成*同步。
產品名稱 | 雞源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 |
英文名稱 | 詳見說明書 |
編號 | BJP3099 |
通用原則:
1,雞源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒先選擇好探針,然后設計引物使其盡可能的靠近于探針。
2, 擴增子的長度應不超過400bp,理想的能在100-150bp內,擴增片斷約短,有效的擴增反應就越容易獲得。較短的擴增片斷也容易保證分析的一致性
3, 保持GC含量在20%和80%之間,GC富含區容易產生非特異反應,從而會導致擴增效率的降低,及在SG分析中非特異信號。
4, 為了保證效率和重復性,應避免重復的核苷酸序列,尤其是G(不能有4個連續的G)
5, 將引物和探針互相進行配對檢測,以避免二聚體和發卡結構的形成。
b),探針設計指導
1,在設計引物之前設計探針
2,探針的Tm值應在68-70℃之間,如果是目測探針,則要仔細審查GC富含區。
3,探針的5’端要避免有鳥氨酸,5’G會有淬滅作用,即使被切割下來這種淬滅作用也還會存在
4,選擇C多于G的鏈作探針,G的含量多于C會降低反應效率,這時就應選擇配對的另一條鏈作為探針。
6, 探針應盡可能的短,不要超過30個bp。
7, 檢測探針的DNA折疊和二級結構。
服務流程:
1.客戶認真寫好訂單,提供待檢基因相關信息;
2.簽訂技術服務合同,支付預付款(30-50%);
3.設計合成定量PCR引物(或客戶提供文獻引物委托本公司合成);
4.DNA/RNA的抽提、定量、RNA反轉錄;
5.PCR預實驗,主要檢測引物的特異性和擴增效率;
6.正式定量實驗:對所有樣品上機檢測;
7.實驗結果和數據分析,形成報告。
以下是公司*產品:
巨噬細胞來源的趨化因子抗體Thymol;麝香草酚
淋巴細胞趨化因子CCL21抗體Edaravone;依達拉奉
嗜酸粒細胞趨化蛋白3抗體Guaiacol;愈創木酚
細胞表面趨化因子受體2/5抗體Chondroitin sulfate;硫酸軟骨素
細胞表面趨化因子受體2A抗體Hymecromone;4-基傘形酮
細胞表面趨化因子受體2B抗體Albumin Bovine Ⅴ;牛血清白蛋白Ⅴ ≥98%(HPLC)
細胞表面趨化因子受體7抗體Cryptochlorogenic acid;隱綠原酸
CXCL10趨化因子10/干擾素誘導蛋白10抗體Neochlorogenic acid;新綠原酸
細胞表面趨化因子受體8抗體Fucoidan;巖藻多糖(只檢測多糖含量)
細胞表面趨化因子受體9抗體Tremella polysaccharide;銀耳多糖Pelargonidin chloride;氯化天竺葵素1 x 10^6 cellsT25培養瓶
Eriocitrin;圣草次苷1 x 10^6 cellsT25培養瓶
Voriconazole;伏立康唑1 x 10^6 cellsT25培養瓶
trans-Cinnamic acid;肉桂酸1 x 10^6 cellsT25培養瓶
Tannic acid;單寧酸/丹寧酸/鞣酸1 x 10^6 cellsT25培養瓶
Vancomycin HCl;鹽酸萬古1 x 10^6 cellsT25培養瓶
Gentamicin sulfate;硫酸慶大1 x 10^6 cellsT25培養瓶
Glycyrrhizic acid;甘草酸1 x 10^6 cellsT25培養瓶
D-γ-Tocotrienol;D-γ-生育三烯酚1 x 10^6 cellsT25培養瓶
Aloin;蘆薈苷1 x 10^6 cellsT25培養瓶
產品特點:
全新的熱啟動DNA聚合酶-Hot Start Taq DNA聚合酶,可在PCR反應的過程中抑制非特異擴增,從而最大限度地減少非特異性擴增產物的產生,提高熒光定量PCR反應的特異性;
采用新型的熒光染料EvaGreen,與傳統熒光染料相比,對PCR反應抑制更小,而且熒光信號更強,檢測靈敏度更高;
含有UNG的試劑盒可以防止PCR產物污染體系,進而有效防止實驗過程中PCR產物的交叉污染;
TaqMan熒光定量PCR試劑盒提供了除引物、探針、模板外的所有實驗所需組分,并配備2×Buffer,可完成不同類型熒光探針的實時熒光定量PCR反應,方便用戶使用;
試劑盒的通用性強,可適用于Roche的Light Cycler、ABI各型實時熒光定量PCR儀和。