詳細(xì)介紹
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:
產(chǎn)品名稱 | 多瘤病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 |
英文名稱 | Washington University Polyomavirus(WUPyV)WU |
編號 | BJP3051 |
實時熒光定量PCR:
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此,實時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的:
1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性*,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確,重現(xiàn)性的定量方法,已得到全世界的*,廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。定量PCR除可以對樣品的初始濃度進(jìn)行準(zhǔn)確定量外,還有其它多種豐富的應(yīng)用。還包括基因表達(dá)調(diào)控情況的分析、等位基因的分析等。
熒光定量PCR服務(wù):
多瘤病毒探針法熒光定量PCR試劑盒簡介:實時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出,該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化;比較不同組織的mRNA表達(dá)差異;驗證基因芯片,siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),全部實驗皆使用進(jìn)口試劑完成,主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務(wù)要求:
(01)請您提供新鮮的且盡量多的材料;或直接提供純化好的總RNA(大于 5 ug/樣品);或直接提供純化好的DNA(大于 5 ug/樣品)。
(02)請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。
(03)請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料:DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
(01)引物(探針)設(shè)計與合成。
(02)提取DNA/RNA,樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
(03)進(jìn)行Real Time PCR實驗,進(jìn)行實驗結(jié)果分析。
(04)實驗完成后,提供完整的實驗報告(含軟件分析結(jié)果)及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標(biāo)準(zhǔn):
我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費標(biāo)準(zhǔn)。
熒光化學(xué)物質(zhì):
實時熒光定量PCR所使用的熒光物質(zhì)可分為兩種:熒光探針和熒光染料。現(xiàn)將其原理簡述如下:
1. TaqMan熒光探針:PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術(shù)既可進(jìn)行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術(shù)平臺。
2. SYBR熒光染料:在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進(jìn)行結(jié)合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應(yīng)是否特異。
3. 分子信標(biāo):是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補配對,導(dǎo)致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近,不會產(chǎn)生熒光。PCR產(chǎn)物生成后,退火過程中,分子信標(biāo)中間部分與特定DNA序列配對,熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。
以下產(chǎn)品是公司正在*產(chǎn)品:
白介素10抗體Physcion;大黃素醚
白介素12抗體Quercitrin;槲皮苷
白介素13抗體Ginsenoside Rf;人參皂苷Rf
白細(xì)胞介素-16抗體Ginsenoside Rg2;人參皂苷Rg2
白介素-17抗體Tetrahydroberberine;四氫小檗堿
白細(xì)胞介素-18/干擾素γ誘導(dǎo)因子抗體Angelicin;異補骨脂素
白介素受體相關(guān)蛋白樣1前體蛋白抗體Icaritin;羊藿素
白介素1α抗體Fraxin;秦皮苷
白介素1β抗體Pranoprofen;普拉洛芬
白介素2抗體Ginsenoside Rd;人參皂苷RdMinocycline hydrochloride 美滿/鹽酸米諾環(huán)素1 x 10^6 cellsT25培養(yǎng)瓶
Minocycline hydrochloride 美滿/鹽酸米諾環(huán)素1 x 10^6 cellsT25培養(yǎng)瓶
Monensin sodium 莫能鈉/莫能菌素鈉1 x 10^6 cellsT25培養(yǎng)瓶
Monensin sodium 莫能鈉/莫能菌素鈉1 x 10^6 cellsT25培養(yǎng)瓶
Neomyein Sulfate 硫酸新1 x 10^6 cellsT25培養(yǎng)瓶
Neomyein Sulfate 硫酸新1 x 10^6 cellsT25培養(yǎng)瓶
Nourseothricin Sulfate 諾爾絲菌素1 x 10^6 cellsT25培養(yǎng)瓶
Nourseothricin Sulfate 諾爾絲菌素1 x 10^6 cellsT25培養(yǎng)瓶
Nourseothricin Sulfate 諾爾絲菌素 無1 x 10^6 cellsT25培養(yǎng)瓶
Novobiocin Sodium Salt 新生1 x 10^6 cellsT25培養(yǎng)瓶