腰果源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

產(chǎn)品特點：

    全新的熱啟動DNA聚合酶-Hot Start Taq DNA聚合酶，可在PCR反應(yīng)的過程中抑制非特異擴(kuò)增，從而最大限度地減少非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的產(chǎn)生，提高熒光定量PCR反應(yīng)的特異性；
    采用新型的熒光染料EvaGreen，與傳統(tǒng)熒光染料相比，對PCR反應(yīng)抑制更小，而且熒光信號更強，檢測靈敏度更高；
    含有UNG的試劑盒可以防止PCR產(chǎn)物污染體系，進(jìn)而有效防止實驗過程中PCR產(chǎn)物的交叉污染；
TaqMan熒光定量PCR試劑盒提供了除引物、探針、模板外的所有實驗所需組分，并配備2×Buffer，可完成不同類型熒光探針的實時熒光定量PCR反應(yīng)，方便用戶使用；
    試劑盒的通用性強，可適用于Roche的Light Cycler、ABI各型實時熒光定量PCR儀和。

產(chǎn)品名稱	腰果源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱	詳見說明書
編號	BJP3137

通用原則：
1，先選擇好探針，然后設(shè)計引物使其盡可能的靠近于探針。
2， 擴(kuò)增子的長度應(yīng)不超過400bp，理想的能在100－150bp內(nèi)，擴(kuò)增片斷約短，有效的擴(kuò)增反應(yīng)就越容易獲得。較短的擴(kuò)增片斷也容易保證分析的一致性
3， 保持GC含量在20％和80％之間，GC富含區(qū)容易產(chǎn)生非特異反應(yīng)，從而會導(dǎo)致擴(kuò)增效率的降低，及在SG分析中非特異信號。
4， 為了保證效率和重復(fù)性，應(yīng)避免重復(fù)的核苷酸序列，尤其是G（不能有4個連續(xù)的G）
5， 將引物和探針互相進(jìn)行配對檢測，以避免二聚體和發(fā)卡結(jié)構(gòu)的形成。
b），探針設(shè)計指導(dǎo)
1，在設(shè)計引物之前設(shè)計探針
2，探針的Tm值應(yīng)在68－70℃之間，如果是目測探針，則要仔細(xì)審查GC富含區(qū)。
3，探針的5’端要避免有鳥氨酸，5’G會有淬滅作用，即使被切割下來這種淬滅作用也還會存在
4，選擇C多于G的鏈作探針，G的含量多于C會降低反應(yīng)效率，這時就應(yīng)選擇配對的另一條鏈作為探針。
6， 探針應(yīng)盡可能的短，不要超過30個bp。
7， 檢測探針的DNA折疊和二級結(jié)構(gòu)。
腰果源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒服務(wù)流程:
1.客戶認(rèn)真寫好訂單，提供待檢基因相關(guān)信息；
2.簽訂技術(shù)服務(wù)合同，支付預(yù)付款（30-50%)；
3.設(shè)計合成定量PCR引物（或客戶提供文獻(xiàn)引物委托本公司合成）；
4.DNA/RNA的抽提、定量、RNA反轉(zhuǎn)錄；
5.PCR預(yù)實驗，主要檢測引物的特異性和擴(kuò)增效率；
6.正式定量實驗：對所有樣品上機檢測；
7.實驗結(jié)果和數(shù)據(jù)分析，形成報告。
以下是公司*產(chǎn)品：

阿斯巴甜安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)品Testosterone 睪酮（睪甾酮）

門冬氨酸標(biāo)準(zhǔn)品Testosterone 睪酮（睪甾酮）98%  國產(chǎn)

阿司匹林標(biāo)準(zhǔn)品Testosterone 睪酮（睪甾酮）98%  國產(chǎn)

阿司咪唑標(biāo)準(zhǔn)品Menadione 維生素K3

阿替洛爾標(biāo)準(zhǔn)品Theophylline 茶堿

阿托伐他汀鈣標(biāo)準(zhǔn)品Theophylline 茶堿

阿托伐他汀相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品VitaminB6 維生素B6（鹽酸吡哆素） USA

阿托伐他汀相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品VitaminB6 維生素B6（鹽酸吡哆素） USA

阿托伐他汀相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品cis-Aconitic acid   順烏頭酸

阿托伐他汀相關(guān)物質(zhì)D標(biāo)準(zhǔn)品Maltitol 麥芽糖醇載脂蛋白A1抗體Asiatic acid；積雪草酸

FasL抗體Bufalin；蟾毒靈

原纖維蛋白1抗體Hederagenin；常春藤皂苷元

Fe65 蛋白抗體Theaflavin；茶黃素

肝素結(jié)合生長因子/酸性成纖維細(xì)胞生長因子抗體(+)-Nootkatone；諾卡酮

纖維母細(xì)胞生長因子3抗體Disodium 5'-Inosinate；5'-肌苷酸二鈉

纖維母細(xì)胞生長因子4抗體Isoalantolactone；異土木香內(nèi)酯

纖維母細(xì)胞生長因子5抗體Cinobufagin；華蟾酥毒基

角質(zhì)形成細(xì)胞生長因子受體/纖維母細(xì)胞生長因子-7抗體1-Kestose；蔗果三糖

成纖維細(xì)胞生長因子-8/纖維母細(xì)胞生長因子-8抗體Enoxolone；18β-甘草次酸

原理:
所謂實時熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
檢測方法
1.SYBRGreenⅠ法：
在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
SYBR定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時，報告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。