原理:
所謂實時熒光定量PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
檢測方法
1.SYBRGreenⅠ法：
在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后，發射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。
SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與PCR產物的形成*同步。

通用原則：
1，拭子病毒運輸液B先選擇好探針，然后設計引物使其盡可能的靠近于探針。
2， 擴增子的長度應不超過400bp，理想的能在100－150bp內，擴增片斷約短，有效的擴增反應就越容易獲得。較短的擴增片斷也容易保證分析的一致性
3， 保持GC含量在20％和80％之間，GC富含區容易產生非特異反應，從而會導致擴增效率的降低，及在SG分析中非特異信號。
4， 為了保證效率和重復性，應避免重復的核苷酸序列，尤其是G（不能有4個連續的G）
5， 將引物和探針互相進行配對檢測，以避免二聚體和發卡結構的形成。
b），探針設計指導
1，在設計引物之前設計探針
2，探針的Tm值應在68－70℃之間，如果是目測探針，則要仔細審查GC富含區。
3，探針的5’端要避免有鳥氨酸，5’G會有淬滅作用，即使被切割下來這種淬滅作用也還會存在
4，選擇C多于G的鏈作探針，G的含量多于C會降低反應效率，這時就應選擇配對的另一條鏈作為探針。
6， 探針應盡可能的短，不要超過30個bp。
7， 檢測探針的DNA折疊和二級結構。
服務流程:
1.客戶認真寫好訂單，提供待檢基因相關信息；
2.簽訂技術服務合同，支付預付款（30-50%)；
3.設計合成定量PCR引物（或客戶提供文獻引物委托本公司合成）；
4.DNA/RNA的抽提、定量、RNA反轉錄；
5.PCR預實驗，主要檢測引物的特異性和擴增效率；
6.正式定量實驗：對所有樣品上機檢測；
7.實驗結果和數據分析，形成報告。

以下是公司*產品：

3-叔基-4-羥基茴香醚標準品Ethyl methyl sulfonate 基磺酸酯(EMS)

基叔基醚標準品Thioacetamide 硫代酰胺

羥苯酯標準品Captopril 卡托普利

卡麥角林標準品Bromocresol Green sodium salt 溴酚綠鈉

骨化二醇標準品溴酚綠

鮭降鈣素標準品Rhodamine 123 羅丹明123   Sigma

鮭降鈣素雜質標準品 Dihydrorhodamine 123 二氫羅丹明123

鈣三醇標準品resazurin刃天青

骨化三醇溶液標準品Phenytoin sodium 苯妥英鈉

醋酸鈣標準品Phenytoin sodium 苯妥英鈉葡聚糖T-10標準品Brilliant  green 亮綠

葡聚糖40標準品N-Acetyl-L-methionine N-酰-L-蛋氨酸

葡聚糖40系統適用性用標準品D-Phenylalanine  D-苯氨酸

葡聚糖70標準品DL-Lysine DL-賴氨酸

葡聚糖70系統適用性用標準品N-(9-Fluorenylmethoxycarbonyloxy)succinimide 9-芴基-N-琥珀酰亞胺基碳酸酯    

右旋糖酐死體積標記物標準品N-Acetyl-DL-Leucine N-酰-DL-亮氨酸

葡聚糖4校準用標準品Salicylaldehyde 水楊

葡聚糖10校準用標準品O-(2,4-dinitrophenyl)hydroxylaMine 2,4-二硝基苯基羥胺

葡聚糖40校準用標準品Fmoc-Tyr-OH Fmoc-L-酪氨酸

葡聚糖70校準用標準品L-Aspartic acid Mg salt L-天門冬氨酸鎂

產品特點：

    全新的熱啟動DNA聚合酶-Hot Start Taq DNA聚合酶，可在PCR反應的過程中抑制非特異擴增，從而最大限度地減少非特異性擴增產物的產生，提高熒光定量PCR反應的特異性；
    采用新型的熒光染料EvaGreen，與傳統熒光染料相比，對PCR反應抑制更小，而且熒光信號更強，檢測靈敏度更高；
    含有UNG的試劑盒可以防止PCR產物污染體系，進而有效防止實驗過程中PCR產物的交叉污染；
TaqMan熒光定量PCR試劑盒提供了除引物、探針、模板外的所有實驗所需組分，并配備2×Buffer，可完成不同類型熒光探針的實時熒光定量PCR反應，方便用戶使用；
    試劑盒的通用性強，可適用于Roche的Light Cycler、ABI各型實時熒光定量PCR儀和。