實時熒光定量PCR：

實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限，實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現性PCR循環在到達Ct值所在的循環數時，剛剛進入真正的指數擴增期（對數期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現性*，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現性的定量方法，已得到全世界的*，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。定量PCR除可以對樣品的初始濃度進行準確定量外，還有其它多種豐富的應用。還包括基因表達調控情況的分析、等位基因的分析等。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務：
簡介：實時熒光定量PCR技術于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。
1、熒光定量PCR服務要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。
（02）請提供已知的全長基因序列。
（03）請提供盡可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設計與合成。
（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉錄成cDNA。
（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結果分析。
（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料。
3、熒光定量PCR的收費標準：
  我公司根據客戶的樣品數量進行不同的收費標準。
以下產品是公司正在*產品：
 

2-羥基喹啉 血管緊張素原抗體

8-羥基喹啉銅鹽 血管緊張素轉換酶2抗體

8-羥基喹啉硫酸鹽 血管緊張素轉換酶抗體

8-羥基喹啉硫酸鹽 血管生成素-1抗體

8-羥基喹啉硫酸鹽 血管生成素-2抗體

喹啉硫酸鹽 血管位蛋白樣2/血管生成素樣蛋白-2抗體

磷酸氯喹 血管位蛋白樣4/血管生成素樣蛋白-4抗體

磷酸氯喹 血管組織血管緊張素Ⅱ1型受體抗體

4,4-二羥基二苯砜 血小板內皮細胞黏附分子-1抗體

二苯砜 氧化還原因子1抗體鐵屎米酮DuRed（效果同GelRed）核酸染料（10,000× DMSO溶液）

呫噸酮DuGreen（效果同GelGreen）核酸染料（10,000× 水溶液）

土槿酸 DDuGreen（效果同GelGreen）核酸染料（10,000× DMSO溶液）

吐葉醇RTGreen（效果同EvaGreen）核酸染料（20× 水溶液）

蛻皮甾酮-20,22-單酮化物RTGreen（效果同EvaGreen）核酸染料（20× 水溶液）

脫皮甾酮 2,3:20,22-二縮酮PicaGreen（效果同PicoGreen）dsDNA 定量檢測試劑 *2000次*

脫水長葉九里香內酯PicaGreen（效果同PicoGreen）dsDNA 定量檢測試劑 *2000次*

脫氧青蒿素OligoGreen（效果同OliGreen）ssDNA 定量檢測試劑 *2000次*

脫氧鴨嘴花堿酮OligoGreen（效果同OliGreen）ssDNA 定量檢測試劑 *2000次*

妥包嗪RibaGreen（效果同RiboGreen）RNA 定量檢測試劑 *2000次*

熒光化學物質：
兔粘液瘤病毒探針法熒光定量PCR試劑盒實時熒光定量PCR所使用的熒光物質可分為兩種：熒光探針和熒光染料。現將其原理簡述如下：
1. TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與PCR產物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析，又可分析基因突變（SNP），有望成為基因診斷和個體化用藥分析的技術平臺。
2. SYBR熒光染料：在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后，發射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結合，因此可以通過溶解曲線，確定PCR反應是否特異。
3. 分子信標：是一種在5和3末端自身形成一個8個堿基左右的發夾結構的莖環雙標記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補配對，導致熒光基團與淬滅基團緊緊靠近，不會產生熒光。PCR產物生成后，退火過程中，分子信標中間部分與特定DNA序列配對，熒光基因與淬滅基因分離產生熒光 。