詳細介紹
通用原則:
1,貓源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒先選擇好探針,然后設計引物使其盡可能的靠近于探針。
2, 擴增子的長度應不超過400bp,理想的能在100-150bp內,擴增片斷約短,有效的擴增反應就越容易獲得。較短的擴增片斷也容易保證分析的一致性
3, 保持GC含量在20%和80%之間,GC富含區容易產生非特異反應,從而會導致擴增效率的降低,及在SG分析中非特異信號。
4, 為了保證效率和重復性,應避免重復的核苷酸序列,尤其是G(不能有4個連續的G)
5, 將引物和探針互相進行配對檢測,以避免二聚體和發卡結構的形成。
b),探針設計指導
1,在設計引物之前設計探針
2,探針的Tm值應在68-70℃之間,如果是目測探針,則要仔細審查GC富含區。
3,探針的5’端要避免有鳥氨酸,5’G會有淬滅作用,即使被切割下來這種淬滅作用也還會存在
4,選擇C多于G的鏈作探針,G的含量多于C會降低反應效率,這時就應選擇配對的另一條鏈作為探針。
6, 探針應盡可能的短,不要超過30個bp。
7, 檢測探針的DNA折疊和二級結構。
產品名稱 | 貓源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 |
英文名稱 | 詳見說明書 |
編號 | BJP3109 |
產品特點:
全新的熱啟動DNA聚合酶-Hot Start Taq DNA聚合酶,可在PCR反應的過程中抑制非特異擴增,從而最大限度地減少非特異性擴增產物的產生,提高熒光定量PCR反應的特異性;
采用新型的熒光染料EvaGreen,與傳統熒光染料相比,對PCR反應抑制更小,而且熒光信號更強,檢測靈敏度更高;
含有UNG的試劑盒可以防止PCR產物污染體系,進而有效防止實驗過程中PCR產物的交叉污染;
TaqMan熒光定量PCR試劑盒提供了除引物、探針、模板外的所有實驗所需組分,并配備2×Buffer,可完成不同類型熒光探針的實時熒光定量PCR反應,方便用戶使用;
試劑盒的通用性強,可適用于Roche的Light Cycler、ABI各型實時熒光定量PCR儀和。
服務流程:
1.客戶認真寫好訂單,提供待檢基因相關信息;
2.簽訂技術服務合同,支付預付款(30-50%);
3.設計合成定量PCR引物(或客戶提供文獻引物委托本公司合成);
4.DNA/RNA的抽提、定量、RNA反轉錄;
5.PCR預實驗,主要檢測引物的特異性和擴增效率;
6.正式定量實驗:對所有樣品上機檢測;
7.實驗結果和數據分析,形成報告。
原理:
所謂實時熒光定量PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
檢測方法
1.SYBRGreenⅠ法:
在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,發射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。
SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法:
探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物的形成*同步。
以下是公司*產品:
肝再生增強因子抗體L-谷氨酸溶液(L-Glutamic acid ,Liquid)(200mM)
抗堿性磷酸酶抗體酮酸鈉(Sodium Pyruvate)(100mM) 索開
α-基酰基輔酶A消旋酶抗體 NAAS 非必需氨基酸(100×)
神經元突觸前膜蛋白抗體EDTA消化液(0.02%)
β淀粉樣肽1-42 (C端抗體)胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) 含酚紅
β淀粉樣肽(1-16)抗體胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) 不含酚紅
β淀粉樣肽β-Amyloid 1-40/Aβ1-40 C端抗體胰蛋白酶消化液(0.25%) 不含酚紅
血管生成素-1抗體胰蛋白酶消化液(0.25%) 含酚紅
血管生成素-2抗體通用細胞凍存液
錨定蛋白G抗體無血清細胞凍存液 Cell Freezing MediumAPC活化蛋白C抗體Cabazitaxel;卡巴他賽
載脂蛋白D抗體Gefitinib;吉非替尼
載脂蛋白E抗體Madecassic acid;羥基積雪草酸
淀粉樣肽前體蛋白抗體Sodium Houttuyfonate;魚腥草素鈉
水通道蛋白-2抗體Loganin;馬錢苷
水通道蛋白-3抗體Psoralidin;補骨脂定
水通道蛋白-4抗體Cyanidin-3-O-Rutinoside;矢車菊素-3-O-蕓香糖苷
雄激素受體抗體Naringin dihydrochalcone;柚皮苷二氫查爾酮
ARC抗體Cardamomin;豆蔻明
ADP核糖基化因子6抗體1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl/DPPH;1,1-二苯基-2-苦基肼