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目錄:上海貝博生物科技有限公司>>細胞分析>>細胞代謝>> 丙二醛(MDA)檢測試劑盒

丙二醛(MDA)檢測試劑盒
  • 丙二醛(MDA)檢測試劑盒
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準
  • 品牌 貝博生物
  • 型號
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 所在地
屬性

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更新時間:2024-12-31 19:38:41瀏覽次數(shù):144評價

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產(chǎn)品概述 product description
保存溫度
2-8℃ 避光
注意事項
開蓋后組份按要求條件保存。
有效期
6個月
檢測方法
分光光度計
適用樣本
血清血漿/組織/細胞
產(chǎn)品特點
1.本試劑盒中試劑均無刺激性氣味,對操作人員無任何毒害。
2.快速準確,操作簡便,每小時可測100例以上樣本。
3.靈敏度高,血清或血漿樣品只需0.1 ml,或者更少。
4.再現(xiàn)性好,變異系數(shù)CV=1.5%,同一份標本數(shù)次測試結(jié)果相關(guān)極微。
5.呈色穩(wěn)定,呈色后一天內(nèi)測吸光度不變。
6.血清樣品放置40℃,3~5天內(nèi)測試結(jié)果不變。—70℃以下可保存?zhèn)€月至半年。
7.測試面廣,可測血清、血漿、各種組織勻漿,培養(yǎng)細胞等。
8.不需昂貴與特殊儀器,只需恒溫水浴箱或鋁鍋、鋁盆開蓋煮沸,及721、722、751、752分光光度計任一型號均可。
9.穩(wěn)定,不受氣溫等外界因素的影響。
產(chǎn)品應(yīng)用
分光光度計
儀器準備
1.分光光度計(對應(yīng)波長的酶標儀或半自動生化儀)
2.37℃恒溫水浴鍋
3.離心機
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰盒

試劑準備
1.生理鹽水
2.雙蒸水
3.PBS
4.蛋白定量試劑盒
耗材準備
1.試管
2.吸頭
3.離心管
4.96孔板

使用注意事項
1.必須使用干凈的試管。
2.配制試劑時要充分混勻,加樣或加試劑時要垂直加入試劑中,避免加到管壁。
3.水浴時間和溫度必須固定。
4.血漿、血清或尿液樣品制備后可以直接用于MDA測定。
5.組織或細胞可以使用PBS或裂解液進行勻漿或裂解。對于組織,組織重量占勻漿液或裂解液的比例為10%;對于細胞,每100萬細胞使用0.1ml裂解液或勻漿液。勻漿或裂解后,1600g離心10分鐘取上清用于后續(xù)測定。勻漿或裂解等樣品制備步驟宜在冰浴或4℃進行操作。
6.對于組織或細胞樣品,樣品準備完畢后可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度,以便于后續(xù)計算單位蛋白重量組織或細胞內(nèi)的MDA含量。
7.95℃水浴用帶蓋試管,如無帶蓋試管,可用保鮮膜扎口,水浴時用針扎一小孔。
8.試劑A溫度低時會凝固,使用前水浴加熱溶解至透明。
9.測定樣品吸光度值較低時,可將水浴延長至80min,但應(yīng)同時延長,以免造成批間差異。
10.避免使用EDTA、枸櫞酸、氟化鈉、草酸等抗凝劑。
11.待測樣本如不能及時測定,應(yīng)置于-20℃保存,4天內(nèi)穩(wěn)定。
使用方法
樣品測定:
1. 樣品處理
①血清、血漿、尿液、腦脊液樣本:從待測樣本中分理出的血清或血漿不應(yīng)有溶血,直接檢測,如超過線性范圍,用生理鹽水稀釋后檢測。
②組織、細胞等樣本:組織或細胞可以使用PBS或貝博的Western及IP細胞裂解液等進行勻漿或裂解。
勻漿或裂解組織時,組織重量占勻漿液或裂解液的比例應(yīng)為10%;
對于細胞,每106 個細胞使用0.1ml裂解液或勻漿液。勻漿或裂解后,1600g離心10min,取上清用于后續(xù)測定。
勻漿或裂解等樣品制備步驟宜在冰浴或4℃進行操作。
樣品準備完畢后可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度,以便于后續(xù)計算單位蛋白重量組織或細胞內(nèi)的MDA含量。

2. 試劑配制:
TBA工作液的配制: 稱取適量TBA,用TBA稀釋液配制成濃度為0.68%的TBA工作液。TBA工作液需溶解后再使用,可以加熱到60-70℃促溶,并可通過反復(fù)劇烈Vortex促溶。配制好的TBA工作液4℃避光保存,至少3-4個月內(nèi)有效。

3. MDA檢測工作液的配制:臨檢測前,根據(jù)待測定的樣品數(shù)(含對照),參考下表新鮮配制適量的MDA檢測工作液。

4. 稀釋標準品:
取適量標準品用恰當(dāng)溶液稀釋至1、2、5、10、20、50μM(如果進行簡易快速檢測,標準品直接稀釋10μM)。
注意:待測樣品為血清、血漿時,標準品宜用生理鹽水稀釋;待測樣品由勻漿液、裂解液、PBS獲得時,標準品宜用相同溶液稀釋。其原則是保證空白管、標準管、測定管具有可比性。

5. 樣品測定:
離心管或其它適當(dāng)容器內(nèi)加入0.1ml勻漿液、裂解液、PBS、生理鹽水等適當(dāng)溶液作為空白對照加入0.1ml 上述不同濃度標準品用于制作標準曲線,加入0.1ml樣品用于測定;隨后加入4.14mlMDA檢測工作液。
注意:待測樣品為血清、血漿時,標準品宜用生理鹽水稀釋;待測樣品由勻漿液、裂解液、PBS獲得時,標準品宜用相同溶液稀釋。

在帶蓋試管中按下表配制檢測反應(yīng)體系:

6. 混勻, 加蓋,95℃水浴煮沸40min,加熱時務(wù)必注意避免液體暴沸濺出。如果使用加熱塊(Heat block)進行加熱注意用重物壓緊離心管蓋;如果使用沸水浴,則需使用可把蓋子鎖死的離心管或螺旋蓋離心管,或用Parafilm封住離心管口,用針頭刺一小孔。和準確的加熱方法是使用帶有熱蓋并可以加熱金屬浴。
7. 水浴或流水冷卻至室溫。
8. 在3000g離心15分鐘或4000g離心10分鐘。
9. 取上清,蒸餾水調(diào)零,用分光光度計或酶標儀檢測532nm或535nm處吸光值。如果用分光光度計,比色杯光徑應(yīng)為1cm,加入的上清量因根據(jù)比色杯的最小量程而定;如果用酶標儀,96孔板每孔應(yīng)加200μl上清液。
如果不方便測定532nm或535nm的吸光度,也可以測定530-540nm之間的吸光度。

結(jié)果計算:
對于血漿、血清或尿液等樣品可以直接根據(jù)標準曲線計算;也可以簡易快速檢測方法,采用如果進行簡易快速檢測,直接以10μM標準品進行計算,獲得MDA的摩爾濃度。
對于細胞、或組織樣品,計算出樣品溶液中的MDA含量后,可以通過單位重量的蛋白含量或組織重量等來表示最初樣品中的MDA含量,例如μmol/mg蛋白或μmol/mg組織。

簡易快速血清、血漿、尿液等液體樣品中MDA含量計算公式:
血清中MDA含量(umol/L)
=(測定管吸光度-空白管吸光度)÷(標準管吸光度-空白管吸光度)×10 × 樣品測試前稀釋倍數(shù)

簡易快速細胞、組織樣品中MDA含量計算公式:
組織細胞中MDA含量(umol/mg)
=(測定管吸光度-空白管吸光度)÷(標準管吸光度-空白管吸光度)× 10 ÷ 樣品蛋白濃度(mg/ml)

參考取樣量:
血清(漿)尿液取0.1ml;
低密度脂蛋白懸液取0.1~0.2 ml。
食用油取0.03ml;
細胞懸液細胞上清0.1~0.2 ml。
肝組織、心肌、肌肉組織等,取5%或10%勻漿0.1~0.2 ml較好。

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