試劑的組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 5mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：液體 200μL×1 支，4℃保存；

試劑三：液體 4mL×1 瓶，4℃保存；

試劑四：粉劑×2 瓶，4℃保存。

產品簡介：

產品名稱：花青素還原酶（ANR）試劑盒說明書

規格：24樣 48樣 48樣 96樣

貨號：AS370

檢測方法：紫外分光光度法 紫外分光光度法 微板法 微板法

產品分類：苯丙烷代謝途徑

貯存溫度：2～8℃。

本試劑盒保質期：6個月。本產品僅用于科研實驗。

所需的儀器和用品：

可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶（SOD）的測定：

建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗

樣本和試劑浪費！

1、樣本制備

① 組織樣本：

取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進行

勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測液。

【注】：若增加樣本量，可按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取

② 細菌/細胞樣本：

先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL

提取液，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；

12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

【注】：若增加樣本量，可按照細菌/細胞數量（10

4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測；若渾濁，離心后取上清檢測。

CLEC2D/OCIL  CLEC2D抗體 規格: 0.2ml

KNDC1  腦9抗體 規格: 0.2ml

Rabbit Anti-mouse IgM/PE  PE標記的兔抗小鼠IgM 規格: 0.1ml

ASB4  含錨重復序列-細胞因子信號抑制物盒家族4抗體 規格: 0.2ml

Lambda Light Chain  λ輕鏈抗體 規格: 0.1ml

Thioredoxin 2  線粒體硫氧還2抗體 規格: 0.1ml

Rabbit anti-MG IgG/PE  PE標記的兔抗爪沙鼠IgG 規格: 0.1mlNonylphenol  壬基抗體 規格: 1ml

TSPAN3  四分子交聯體3抗體（四旋） 規格: 0.2ml

phospho-PAK1(Thr212)  磷化p21激活激1抗體 規格: 0.1ml

Rabbit Anti-Biotin/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標記的兔抗抗體IgG 規格: 0.1mlPhospho-Paxillin(Tyr88)  磷化樁Paxillin抗體 規格: 0.1ml

MIP2/GRO Beta/CXCL2  巨噬細胞炎癥2（ GRＯβ）抗體 規格: 0.1ml

花青素還原酶（ANR）試劑盒說明書1916-07-03,4,5-三 規格： 20mg

73030-71-4白術內酯III; 蒼術內酯III 規格： HPLC≥98%,20mg/支

31721-94-55,7-二羥基色原 規格： HPLC≥98%;20mg

55905-53-8波必利 規格： 50mg

N-乙酰-L- 規格： 100mg/支

63223-86-9人參皂Rh1 規格： 20mg

65141-46-0可地爾 規格： 100mg

117718-60-2噻唑煙;純品型;標準品;有證書 規格： 0.1g

129741-57-7白頭翁皂甙 B4 規格： HPLC≥98%，20mg/vial

36284-77-2刺五加葉中;Hederasaponin 規格： 20mg

操作步驟:

實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數。

1.        加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.        棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內配制），酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。

3.        溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。

4.        每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。

5.        溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶標板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.       依序每孔加終止溶液50μl，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8.       用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后立即進行檢測。