一、細胞基本屬性 | ||||
細胞名稱 | 小鼠脊髓神經元細胞 | |||
種屬來源 | 小鼠 | |||
組織來源 | 腦 | |||
生長特性 | 貼壁生長 | |||
形態特征 | 神經元細胞樣 | |||
質量檢測 | NSE免疫熒光染色為陽性,純度高于 90%,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等 | |||
產品規格 | 5x105cells/T25或1mL凍存管 | |||
培養基 | 小鼠脊髓神經元細胞培養基 | |||
培養條件 | 氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃ | |||
換液頻率 | 每2-3天換液一次 | |||
消化液 | 0.25% | |||
產品貨期 | 5-6周左右 | |||
運輸方式 | T25培養瓶/ 順豐快遞(包郵) | |||
供應限制 | 于科學研究,絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用 | |||
背景介紹 | 小鼠脊髓神經元細胞采用膠原酶&聯合消化法、神經元專用培養基培養篩選結合化學試劑抑制法制備而來,小鼠脊髓神經元細胞分離自脊髓組織;脊髓是細細的管束狀的神經結構,位于脊柱的椎管內且被脊椎保護;是源自腦的中樞神經系統延伸部分。中樞神經系統的細胞依靠復雜的聯系來處理傳遞信息。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的神經信息。人和脊椎動物中樞神經系統的一部分,在椎管里面,上端連接延髓,兩旁發出成對的神經,分布到四肢、體壁和內臟。脊髓的內部有一個H形(蝴蝶型)灰質區,主要由神經細胞構成;在灰質區周圍為白質區,主要由有髓神經纖維組成;脊髓是許多簡單反射的中樞。脊髓兩旁發出許多成對的神經(稱為脊神經)分布到全身皮膚、肌肉和內臟器官。脊髓是周圍神經與腦之間的通路,也是許多簡單反射活動的低級中樞。按脊神經的出入可把脊髓也分為相應的31節,31對脊神經就是由不同的脊椎發出的。神經系統最基本的結構和功能單位是神經元,即神經細胞,其大小和外觀在中樞神經系統中差異很大。但都具有胞體和樹突、軸突。胞體又叫核周體,內含神經絲、微管、內質網、游離核糖體和一個有明顯核仁的核。一些大神經元突起的粗面內質網可用Nissl染色顯示,在光鏡下是灰藍色斑塊狀,稱為尼氏小體。樹突和軸突是神經元的突起,能在神經元之間傳遞電沖動,突起的大小和形態各不相同,很難用常規的顯微鏡鑒別。脊髓組織內含有大量膠質細胞,神經元含量少,分離純化難度大,且脊髓神經元細胞是高度分化的終末細胞,不能分裂增殖,培養要求高。剛接種的脊髓神經元呈圓形,體積小,透亮,無突起。培養2-3d,可見胞體增大,突起增多延長;培養6-7d,細胞體大飽滿,突起明顯增加延長并交織成網,光暈明顯,立體感強。培養20d后,死亡細胞明顯增加,細胞出現內空泡,突起粗細不均,甚至脫壁,發生細胞崩解。 | |||
二、細胞培養操作 | ||||
收貨處理 | 取出T25細胞培養瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2,飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h,以穩定細胞狀態 | |||
傳代特征 | 屬于終末分化細胞;屬于不增殖細胞群,建議收到細胞后盡快進行相關實驗 | |||
傳代比例 | 不傳代 | |||
神經元細胞消化方法一 | 1.吸出T25細胞培養瓶中的培養基,用PBS(37℃預熱)清洗細胞一次; 2.添加0.25%消化液0.5mL至培養瓶中,輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后,37℃溫浴1min;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml培養基終止消化; 3.用吸管輕輕吹打混勻、分散細胞,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養; 4.待細胞貼壁后,培養觀察,之后按換液頻率更換新鮮的培養基(37℃預熱) | |||
神經元細胞消化方法二 | 1.吸出T25細胞培養瓶中的培養基,用PBS清洗細胞一次; 2.添加0.25%消化液0.5mL至培養瓶中,輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后,4℃冰箱靜置5min;消化后倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml培養基終止消化; 3.用吸管輕輕吹打混勻、分散細胞,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養; 4.待細胞貼壁后,培養觀察,之后按照換液頻率更換新鮮的培養基(37℃預熱) | |||
細胞收貨脫落 | 1.收集所有細胞懸液,1000rpm,離心5min,保留沉淀; 2.添加0.25%消化液0.5mL至離心管中,重懸沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃ 冰箱靜置5-7min)消化完向離心管內加入5ml培養基終止消化; 3.經1000rpm,離心5min,丟棄上清,用5ml培養基(補加1%FBS,促進貼壁)重懸沉淀,接種于新的培養瓶內; 4.待細胞貼壁后,培養觀察,之后按照換液頻率更換新鮮的培養基(37℃預熱) | |||
備注:由于實驗所用試劑、操作環境及操作手法的不同,以上方法僅供各實驗室參考 客戶在細胞培養過程中,有任何技術問題可以技術服務電話: 按 2,我們隨時給予解答。 | ||||
三、注意事項 | ||||
重要提醒 | 1.培養基于4℃條件下可保存3-6個月。 2.在細胞培養過程中,請注意保持無菌操作。 3.傳代培養過程中,消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。 4.運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的培養基來培養細胞。 | |||
到貨須知 | 1.收到細胞后,首先觀察并拍照記錄細胞瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象,干冰運輸的細胞檢查干冰是否揮發,細胞是否解凍,若有上述現象發生請及時和我們聯系。 2.靜置完成后,取出細胞培養瓶,鏡檢、拍照(當天以及第 2,3 天請拍照),記錄細胞狀態 (所拍照片將作為后續服務依據);建議細胞傳代培養后,定期拍照、記錄細胞生長狀態。 3.由于運輸的原因,部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,是正常現象。個別敏感細胞會出現不穩定的情況,請及時和我們聯系,告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。 4.仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等,確保細胞培養條件一致,若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題,責任由客戶自行承擔。 | |||
四、售后服務 | ||||
重發標準 | 1.細胞運輸途中遭遇的各種問題,細胞丟失、瓶身破損、培養液嚴重漏液等,重發; 2.收到細胞未開封,如出現污染狀況,重發; 3.收到細胞3天內,發現污染問題,經核實后,重發; 4.常溫發貨的細胞靜置 2 小時后,絕大多數細胞未存活,經核實后,重發; 5.常溫發貨的細胞靜置 22 小時并且未開封,出現污染,經核實后,重發; 6.細胞活性問題,請在收到產品 3 天內給我們提出真實的實驗結果,用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,經核實后,重發; 7.視具體情況而定。 | |||
不予重發 | 1.客戶操作造成細胞污染,不重發; 2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態不好,不重發; 3.非我們推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好,不重發; 4.細胞狀態不好,未提供真實清晰的培養前 3 天的細胞狀態照片,不重發; 5.細胞培養時經其它處理導致細胞出現問題的,不重發; 6.收到細胞發現問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的,不重發; 7.視具體情況而定。 |