| 一、細胞基本屬性 | ||||
| 細胞名稱 | NK-92人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞（STR鑒定正確） | |||
| 細胞別稱 | NK-92；人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞；NK-92 MI; NK-92 mi; NK92-MI; NK92MI; NK-92 transfected with MFG-Hil2 | |||
| 種屬來源 | 人 | |||
| 年齡性別 | 男；50歲 | |||
| 組織來源 | 淋巴 | |||
| 生長特性 | 懸浮生長 | |||
| 細胞形態 | 淋巴母細胞樣 | |||
| 細胞代數 | 10代以內 | |||
| 背景介紹 | NK-92是從一位患有急進性非霍奇金淋巴瘤的50歲白人男性外周血單核細胞衍生來的一株白細胞介素-2依賴型NK細胞株。這株細胞對很多惡性細胞有細胞毒性；鉻釋放試驗顯示它能殺死K562和Daudi細胞。 NK-92細胞(經過照射以防止增殖)可以有效地用于血液中白血病的體外免疫清掃而不危及血細胞的功能。NK-92細胞有以下特征： CD2, CD7, CD11a, CD28, CD45, CD54表面標記陽性，CD56亮；CD1, CD3, CD4, CD5, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20, CD23, CD34和HLA-DR表面標記陰性。 | |||
| 注意事項 | NK-92細胞復蘇后需一周左右時間方可恢復狀態，凍存時密度盡量大些 | |||
| STR位點 | Amelogenin:X,Y；CSF1PO:11,12；D13S317:9,12；D16S539:11,12；D18S51:12,17；D21S11:31.2,32；D3S1358:15；D5S818:12,13；D7S820:10,11；D8S1179:12,15；FGA:20,22；PentaD:10,12；PentaE:12；TH01:6,9.3；TPOX:8；vWA:16,18 | |||
| STR鑒定圖片 |  | |||
| 流式鑒定 |  | |||
| 生物安全等級 | 2 | |||
| 細胞規格 | 1×106cells/T25培養瓶或者1mL凍存管包裝 | |||
| 支原體檢測 | 無 | |||
| 保藏機構 | ATCC; CRL-2408 ；中國典型培養物保藏中心細胞庫 | |||
| 培養基 | NK92專用培養基（已添加IL2） | |||
| 培養條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ | |||
| 凍存條件 | 10%DMSO+50%FBS+40%培養基，液氮儲存 | |||
| 倍增時間 | ~40-50 hours | |||
| 細胞貨期 | 現貨，1周左右 | |||
| 運輸方式 | 復蘇發貨（T25瓶免運輸費用）/ 凍存發貨（需加干冰運輸費用） 順豐快遞 | |||
| 供應限制 | 于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用 | |||
| 特別說明 | 以下細胞培養凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主 | |||
| 二、細胞培養操作 | ||||
| 收貨方式 | T25瓶 | 凍存管 | ||
| 收貨處理 | 觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁，將T25瓶置于37度培養箱放置2-3h，以便穩定細胞狀態 | 收到細胞后，需立即轉入液氮凍存或直接復蘇 | ||
| 傳代密度 | 細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養 | 第二天換液并檢查細胞密度 | ||
| 傳代比例 | 傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 | 一管細胞建議接種到6cm培養皿或者T25瓶 | ||
| 傳代方法 | 搖晃培養瓶，使NK-92細胞粗略混勻，取NK-92細胞計數，按每毫升2-3x105個活細胞的細胞密度進行全換液或半換液。每48 h傳一次。 | 37℃水浴融化后，750 rpm離心5 min，棄凍存液，加入培養基重懸，在培養瓶中培養，起始密度為每毫升2-3x105個細胞 | ||
| 注意事項 | 1.運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的培養基來培養細胞。 2.因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。 | 1.收貨時若發現干冰化完，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細胞接種觀察，若未融化可以將細胞按正常步驟保存； 2.為保證細胞的高存活率，收到產品后，請立即解凍復蘇細胞。 | ||
| 到貨須知 | 1.收到NK-92細胞后，首先觀察并拍照記錄細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，干冰運輸的細胞檢查干冰是否揮發，細胞是否解凍，若有上述現象發生請及時和我們聯系。 2.靜置完成后，取出細胞培養瓶，鏡檢、拍照（當天以及第 2,3 天請拍照），記錄細胞狀態 (所拍照片將作為后續服務依據)；建議細胞傳代培養后，定期拍照、記錄細胞生長狀態。 3.由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。 4.仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。 | |||
| 備注：客戶在細胞培養過程中，有任何技術問題可以技術服務電話： 按 2，我們隨時給予解答。 | ||||
| 三、細胞凍存操作 | ||||
| 凍存液配方 | 無血清凍存液，液氮儲存 | |||
| 細胞密度 | 待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例 | |||
| 凍存方法 | 凍存液：10%DMSO+50%FBS+40%培養基，細胞計數后，取1×106~1×107個細胞，750 rpm離心5 min，棄原培養基，加入1 mL凍存液，輕輕混勻，標注封口后，放入凍存盒，置于-80℃24 h，再置于液氮氣象。 | |||
| 注意事項 | 1. IL-2分裝使用，避免反復凍融； 2. 先配置不培養基：用的時候再將IL-2加入培養基中； 3. 傳NK-92細胞時，細胞不能在培養箱外放太久，小于1 h； 4. 重懸NK-92細胞要輕柔，不要太劇烈； 5. 不要加抗菌素，若一定要加，就加1%的青； 6. 全換液比半換液好些，每48 h傳代一次； 7. 培養該細胞一定要IL-2 100-200 U/ml，IL-2濃度無需再增高，過高會影響NK-92細胞生長，也不能再降低，過低細胞會死亡 | |||
| 四、售后服務 | ||||
| 重發標準 | 1.細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養液嚴重漏液等，重發； 2.收到細胞未開封，如出現污染狀況，重發； 3.收到細胞3天內，發現污染問題，經核實后，重發； 4.常溫發貨的細胞靜置 2 小時后，干冰凍存發貨的細胞復蘇 2 天后，絕大多數細胞未存活，經核實后，重發； 5.常溫發貨的細胞靜置 22 小時并且未開封或干冰凍存發貨的細胞復蘇 2 天后，出現污染，經核實后，重發； 6.細胞活性問題，請在收到產品 3 天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經核實后，重發； 7.視具體情況而定。 | |||
| 不予重發 | 1.客戶操作造成細胞污染，不重發； 2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態不好，不重發； 3.非我們推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好，不重發； 4.細胞狀態不好，未提供真實清晰的培養前 3 天的細胞狀態照片，不重發； 5.細胞培養時經其它處理導致細胞出現問題的，不重發； 6.收到細胞發現問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發； 7.視具體情況而定。 | |||
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