| 一、細胞基本屬性 | ||||
| 細胞名稱 | TF-1人紅系白血病細胞（STR鑒定正確） | |||
| 細胞別稱 | TF1; MFD-1；TF-1；人紅白血病細胞 | |||
| 種屬來源 | 人 | |||
| 年齡性別 | 男；35歲 | |||
| 組織來源 | 骨髓 | |||
| 生長特性 | 半貼半懸 | |||
| 細胞形態(tài) | 淋巴母細胞樣 | |||
| 細胞代數(shù) | 10代以內(nèi) | |||
| 背景介紹 | TF-1細胞系1987年由Kitamura T等建立，源于一名35歲日本男性的肝素化骨髓抽取樣本，該患者具有嚴重的全血細胞減少癥。細胞生長依賴于IL-3或GM-CSF，對IL-5無反應。多種淋巴因子和細胞因子對該細胞都有作用，如：IL-1、IL-4、IL-6、IL-9、IL-11、IL-13、CSF、LIF、NGF。該細胞不表達血型糖蛋白A和碳酸酐酶I。由該細胞的形態(tài)和細胞化學特征及珠蛋白基因的組成性表達，顯示該細胞屬于紅系。氯高鐵血紅素和δ氨基乙酰丙酸誘導細胞合成血紅蛋白，TPA刺激細胞向巨噬細胞樣細胞分化。 | |||
| STR位點 | Amelogenin：X，Y；CSF1PO：12，13；D13S317：8，9；D16S539：9，12；D18S51：13；D19S433：14，16；D21S11：30；D2S1338：19；D3S1358：15；D5S818：13；D7S820：12；D8S1179：11，15；FGA：18，19；TH01：7，9；TPOX：8；vWA：15，17； | |||
| 生物安全等級 | 1 | |||
| 細胞規(guī)格 | 1x106cells/T25或1mL凍存管 | |||
| 支原體檢測 | 無 | |||
| 保藏機構 | ATCC; CRL-2003 DSMZ; ACC-334 ECACC; | |||
| 培養(yǎng)基 | RPMI-1640+10%FBS+2ng/ml rhGM-CSF+1%PS | |||
| 培養(yǎng)條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ | |||
| 凍存條件 | 無血清凍存液，液氮儲存 | |||
| 倍增時間 | ~36-72 hours | |||
| 染色體 | 78~104 | |||
| 細胞貨期 | 現(xiàn)貨，1周左右 | |||
| 運輸方式 | 復蘇發(fā)貨（T25瓶免運輸費用）/ 凍存發(fā)貨（需加干冰運輸費用） 順豐快遞 | |||
| 供應限制 | 于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 | |||
| 特別說明 | 以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主 | |||
| 二、細胞培養(yǎng)操作 | ||||
| 收貨方式 | T25瓶 | 凍存管 | ||
| 收貨處理 | 觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁，將T25瓶置于37度培養(yǎng)箱放置2-4h，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài) | 收到細胞后，需立即轉入液氮凍存或直接復蘇 | ||
| 傳代密度 | 細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng) | 第二天換液并檢查細胞密度 | ||
| 傳代比例 | 傳代建議1：2傳代 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 | 一管細胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 | ||
| 傳代方法 | a、收集細胞培養(yǎng)上清：抽出瓶中的培養(yǎng)基和懸浮的細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清，細胞重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基）。 b、剩下貼壁的細胞，用不含鈣、鎂離子的PBS輕輕潤洗細胞1次。 c、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02%EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-3 min（視細胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，加少量培養(yǎng)基終止消化。 d、按3mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻吹下細胞后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 e、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)中。（次傳代建議一個滿的T25傳一個10cm或者2個T25）。 | 將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 | ||
| 注意事項 | 懸浮細胞收貨注意事項： 1、收貨時需鏡下拍照（看密度、狀態(tài)） 2、靜置后需鏡下拍照（看整體密度） a.如密度50%以下，建議換液并豎瓶培養(yǎng) b.如密度50%-80%，建議換液培養(yǎng)，隔天觀察密度 c.如密度90%，建議傳代 3、換液及傳代處理前，培養(yǎng)瓶豎著放置至少半小時（使細胞沉到瓶底）；收集上清，必須將瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基（70ml）全部收集！并用PBS（10ml）潤洗瓶底并收集！離心轉速為1000rpm，5min。 4.運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 5.因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。 | 1.收貨時若發(fā)現(xiàn)干冰化完，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細胞接種觀察，若未融化可以將細胞按正常步驟保存； 2.為保證細胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請立即解凍復蘇細胞。 | ||
| 備注：客戶在細胞培養(yǎng)過程中，有任何技術問題可以技術服務電話： 按 2，我們隨時給予解答。 | ||||
| 三、細胞凍存操作 | ||||
| 凍存液配方 | 無血清凍存液，液氮儲存 | |||
| 細胞密度 | 待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例 | |||
| 凍存方法 | a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加 1 mL血清重懸細胞，進行細胞計數(shù)。 b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。 c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 | |||
| 注意事項 | 凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調整實驗方案 | |||
| 四、售后服務 | ||||
| 重發(fā)標準 | 1.細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā)； 2.收到細胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)； 3.收到細胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實后，重發(fā)； 4.常溫發(fā)貨的細胞靜置 2 小時后，干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇 2 天后，絕大多數(shù)細胞未存活，經(jīng)核實后，重發(fā)； 5.常溫發(fā)貨的細胞靜置 22 小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇 2 天后，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實后，重發(fā)； 6.細胞活性問題，請在收到產(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經(jīng)核實后，重發(fā)； 7.視具體情況而定。 | |||
| 不予重發(fā) | 1.客戶操作造成細胞污染，不重發(fā)； 2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)； 3.非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)； 4.細胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前 3 天的細胞狀態(tài)照片，不重發(fā)； 5.細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導致細胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)； 6.收到細胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)； 7.視具體情況而定。 | |||
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