| 一、細胞基本屬性 | ||||
| 細胞名稱 | NK-92MI（人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞）(STR鑒定正確) | |||
| 細胞別稱 | NK-92 MI; NK-92 mi; NK92-MI; NK92MI; NK-92 transfected with MFG-Hil2 | |||
| 種屬來源 | 人 | |||
| 年齡性別 | 50歲；男性 | |||
| 組織來源 | 外周血 | |||
| 生長特性 | 懸浮生長 | |||
| 細胞形態 | 淋巴母細胞樣 | |||
| 重要提醒 | 1.該細胞復蘇后需一周左右時間方可恢復狀態，凍存時密度盡量大些。 2.培養過程中有少量細胞分泌物屬于正常現象，不影響細胞生長。 3.傳細胞時，細胞不能在培養箱外放太久，小于1 h 4.重懸細胞要輕柔，不要太劇烈 | |||
| 細胞代數 | 10代以內 | |||
| 背景介紹 | NK-92細胞是從一位患有急進性非霍奇金淋巴瘤的50歲白人男性外周血單核細胞衍生來的一株IL-2依賴型NK細胞株。NK-92MI細胞是轉染得到的源自NK-92細胞的IL-2非依賴的NK細胞株。親本細胞NK-92通過微粒體基因轉化法用逆轉錄病毒MFG-hIL-2載體攜帶的人IL-2cDNA進行轉化。可能由于載體整合到基因組DNA中，轉化是穩定的。這株細胞對很多惡性細胞有細胞毒性；鉻釋放試驗顯示它能殺死K562細胞和Daudi細胞。NK-92細胞有以下特征：CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、CD54表面標記陽性；CD1、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD14、CD16、CD19、CD20、CD23、CD34和HLA-DR表面標記陰性。其親本IL-2依賴的細胞株NK-92細胞及另一株同樣來源于NK-92細胞株的IL-2非依賴的細胞株NK-92CI都可從ATCC得到。NK-92MI細胞和NK-92CI細胞這兩個變種都包含、表達并合成hIL-2cDNA。NK-92MI細胞合成的IL-2水平比NK-92CI高，而親本細胞不合成表達。1998年9月提交到ATCC的培養物污染了支原體，其后代通過BM細胞周期蛋白處理21天消除支原體。處理后6周，用Hoechst染色、PCR和標準培養測試進行支原體檢測，結果都呈陰性。 | |||
| 生物安全等級 | 2 | |||
| 細胞規格 | 1×106cells/T25培養瓶或者1mL凍存管包裝 | |||
| 支原體污染 | 無 | |||
| 保藏機構 | ATCC; CRL-2408 | |||
| 培養基 | NK-92MI培養基 | |||
| 培養條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ | |||
| 凍存條件 | 無血清凍存液，液氮儲存 | |||
| 細胞貨期 | 現貨，1周左右 | |||
| 發貨方式 | 復蘇發貨（免運輸費用）/ 凍存發貨（需加干冰運輸費用） 順豐快遞 | |||
| 供應限制 | 于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用 | |||
| 特別說明 | 以下細胞培養凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主 | |||
| 二、細胞培養操作 | ||||
| 收貨方式 | T25瓶 | 凍存管 | ||
| 初步平衡 | 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，放37度培養箱內靜置培養2-4h，以便穩定細胞狀態 | 無須平衡，直接放入-80冰箱（不超過一周）或者液氮罐保存，建議盡早復蘇 | ||
| 傳代密度 | 細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養 | 第三天換液并檢查細胞密度 | ||
| 傳代比例 | 傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 | 一管細胞建議接種到10cm培養皿或者T25瓶 | ||
| 傳代方法 | 搖晃培養瓶，使細胞粗略混勻，取細胞計數，按每毫升2-3×105個活細胞的細胞密度進行全換液或半換液。每48 h傳一次。 | 37℃水浴融化后，850 rpm離心5 min，棄凍存液，加入培養基重懸，在培養瓶中培養，起始密度為每毫升2-3×105個細胞 | ||
| 注意事項 | 懸浮細胞收貨注意事項： 1、收貨時需鏡下拍照（看密度、狀態） 2、靜置后需鏡下拍照（看整體密度） a.如密度50%以下，建議換液并豎瓶培養 b.如密度50%-80%，建議換液培養，隔天觀察密度 c.如密度90%，建議傳代 3、換液及傳代處理前，培養瓶豎著放置至少半小時（使細胞沉到瓶底）；收集上清，必須將瓶內所有培養基（70ml）全部收集！并用PBS（10ml）潤洗瓶底并收集！離心轉速為1000rpm，5min。 4.運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的培養基來培養細胞。 5.因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。 | 1.收貨時若發現干冰化完，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細胞接種觀察，若未融化可以將細胞按正常步驟保存； 2.為保證細胞的高存活率，收到產品后，請立即解凍復蘇細胞。 | ||
| 到貨須知 | 1.收到細胞后，首先觀察并拍照記錄細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，干冰運輸的細胞檢查干冰是否揮發，細胞是否解凍，若有上述現象發生請及時和我們聯系。 2.靜置完成后，取出細胞培養瓶，鏡檢、拍照（當天以及第 2,3 天請拍照），記錄細胞狀態 (所拍照片將作為后續服務依據)；建議細胞傳代培養后，定期拍照、記錄細胞生長狀態。 3.由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。 4.仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。 | |||
| 備注：客戶在細胞培養過程中，有任何技術問題可以技術服務電話： 按 2，我們隨時給予解答。 | ||||
| 三、細胞凍存操作 | ||||
| 凍存液配方 | 無血清凍存液，液氮儲存 | |||
| 細胞密度 | 待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例 | |||
| 凍存方法 | 凍存液：10%DMSO+50%FBS+40%培養基，細胞計數后，取1×106~1×107個細胞，850 rpm離心5 min，棄原培養基，加入1 mL凍存液，輕輕混勻，標注封口后，放入凍存盒，置于-80℃ 24 h，隔天再置于液氮氣象。 | |||
| 注意事項 | 凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調整實驗方案 | |||
| 四、售后服務 | ||||
| 重發標準 | 1.細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養液嚴重漏液等，重發； 2.收到細胞未開封，如出現污染狀況，重發； 3.收到細胞3天內，發現污染問題，經核實后，重發； 4.常溫發貨的細胞靜置 2 小時后，干冰凍存發貨的細胞復蘇 2 天后，絕大多數細胞未存活，經核實后，重發； 5.常溫發貨的細胞靜置 22 小時并且未開封或干冰凍存發貨的細胞復蘇 2 天后，出現污染，經核實后，重發； 6.細胞活性問題，請在收到產品 3 天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經核實后，重發； 7.視具體情況而定。 | |||
| 不予重發 | 1.客戶操作造成細胞污染，不重發； 2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態不好，不重發； 3.非我們推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好，不重發； 4.細胞狀態不好，未提供真實清晰的培養前 3 天的細胞狀態照片，不重發； 5.細胞培養時經其它處理導致細胞出現問題的，不重發； 6.收到細胞發現問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發； 7.視具體情況而定。 | |||
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