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分光光度計(jì)知識(shí)——析譜告訴您
分光光度計(jì)知識(shí)普及
對(duì)于分光光度計(jì)我們應(yīng)用比較廣泛，但是了解甚少，在此為大家介紹一下分光光度計(jì)的有關(guān)知識(shí)，希望能夠更好的了解以及應(yīng)用。
分光光度計(jì)原理：是利用分光光度法通過測(cè)定被測(cè)物質(zhì)在特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)光的吸收度對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析。
分光光度計(jì)主要組成由光源、單色器、樣品室、檢測(cè)器、信號(hào)處理器和顯示與存儲(chǔ)系統(tǒng)組成。
1.分光光度計(jì)按照波長(zhǎng)及應(yīng)用領(lǐng)域的不同可以分為：可見光分光光度計(jì)，紫外分光光度計(jì)，紅外分光光度計(jì)，熒光分光光度計(jì)，原子吸收分光光度計(jì)。
可見光分光光度計(jì)測(cè)定波長(zhǎng)范圍為320-760的可見光區(qū)
紫外分光光度計(jì)測(cè)定波長(zhǎng)范圍為200-400nm的紫外光區(qū)
紅外分光光度計(jì)測(cè)定波長(zhǎng)范圍為大于760nm的紅外光區(qū)
熒光分光光度計(jì)用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜
原子吸收分光光度計(jì)光源發(fā)出被測(cè)的特征光譜輻射被經(jīng)過原子化器后的樣品蒸氣中的待測(cè)元素基態(tài)原子所吸收通過測(cè)定特征輻射被吸收的大小來求出被測(cè)元素的含量。
不同種類的分光光度計(jì)的基本原理相似都是利用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(zhǎng)的光源通過系列分光裝置從而產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的光源。光源透過測(cè)試的樣品后部分光源被吸收通過測(cè)量樣品的吸光值經(jīng)過計(jì)算可以轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
2.分光光度計(jì)按自動(dòng)化程度分類可分:為手動(dòng)、半自動(dòng)、自動(dòng)分光光度計(jì)。
3.分光光度計(jì)按軟件可分為:帶掃描、不帶掃描。
分光光度計(jì)使用的就是TU-1810紫外可見分光光度計(jì)。
根據(jù)紫外可見分光光度計(jì)的儀器結(jié)構(gòu)可以分為三類：?jiǎn)喂馐止夤舛扔?jì)、雙光束分光光度計(jì)和雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)。
1、單光束分光光度計(jì)
單光束是指從光源今發(fā)出的光，經(jīng)過單色器等—系列光學(xué)元件，通過吸收池，后照在檢測(cè)器上時(shí)，始終為一束光。它只官一束單色光(光束只能交替通過參比溶液、樣品溶液)，一只比色皿，一只光電轉(zhuǎn)換器。工作時(shí)，一條光路，先通過多比溶液，再通過試樣溶液進(jìn)行光強(qiáng)度的測(cè)旦。
單光束分光光度計(jì)的特點(diǎn)是結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、價(jià)格低，主要適用于做定量分析，測(cè)量結(jié)果受電源的波動(dòng)影響較大，容易給測(cè)量結(jié)果帶來較大的誤差。所以，它們?cè)谖蛔粕鲜艿较拗啤Ｒ话銇碇v，要求較高的制藥行業(yè)、質(zhì)量檢驗(yàn)行加等不適宜使用單光束紫外可見分光光度訃。
2、雙光束分光光度計(jì)
雙 光束分光光度汁就是有兩束單色光的紫外可見分光光度計(jì)。其光路設(shè)計(jì)基本上與單光束分光光度計(jì)相似。區(qū)別是在單色器與吸收弛之間加了一個(gè)切光器，其作用是以 一定的頻率把一個(gè)光束交替分為強(qiáng)度相等的兩柬光，使一路通過參比溶液，另一路通過樣品溶液。然后由檢測(cè)器交替接收參比信號(hào)和樣品信號(hào)。接收的光信號(hào)轉(zhuǎn)變成 電信號(hào)后，由前置放大器放大，并進(jìn)一步解調(diào)、放大、補(bǔ)償?shù)龋笥娠@示系統(tǒng)顯示。
3.雙 波長(zhǎng)分光光度計(jì)采用兩個(gè)單色器，可以同時(shí)得到兩柬波長(zhǎng)不同的單色光，其光路. 光源發(fā)出的光被兩個(gè)單色器分別分離出波長(zhǎng)為4：和4z的單色光，通過切光 器，將兩束光以一定的時(shí)間間隔交替照射到裝有樣品試液的同一個(gè)吸收池，由檢測(cè)器顯示出試液在波長(zhǎng)4?和42的透射比或吸光度。雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)不僅能測(cè)量 高濃度試樣、多組分混合試樣，而義測(cè)定混濁樣品時(shí)比單波長(zhǎng)測(cè)定更靈敏、更有選擇性。雙波長(zhǎng)測(cè)定時(shí)，兩個(gè)波長(zhǎng)的光通過同一吸收池，pJ以消除因吸收他的參數(shù) 不同、位置不同、污垢以及制備參比溶液等帶來的誤差，從而可以顯著地提高測(cè)定的準(zhǔn)確度。
單光束分光光度計(jì)：由一束經(jīng)過單色器的光，輪流通過參比溶液和樣品溶液，以進(jìn)行光強(qiáng)度測(cè)量，主要適于做定量分析。
雙光束分光光度計(jì)：以兩束光一束通過樣品、另一束通過參考溶液的方式來分析樣品的分光光度計(jì)。這種方式可以克服光源不穩(wěn)定性、某些雜質(zhì)干擾因素等影響，還可以檢測(cè)樣品隨時(shí)間的變化等。
雙光束分光光度計(jì)操作規(guī)程
1.接通電源，打開TU-1901plus 雙光束紫外可見分光光度計(jì)開關(guān)，預(yù)熱15分鐘。
2.根據(jù)自己樣品所需，選擇要分析的波長(zhǎng)，。
3.將空白液及測(cè)定液分別倒入比色杯3/4處，用擦鏡紙擦清外壁，先空白（參比）調(diào)100%/0.000A，然后放樣品測(cè)值
4.比色完畢，關(guān)上電源，取出比色皿洗凈，樣品室用軟布或軟紙擦凈。
【應(yīng)用范圍】
可廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、化工、制藥、質(zhì)量檢驗(yàn)、環(huán)境保護(hù)等方面
【注意事項(xiàng)】
為了防止腐蝕性氣體進(jìn)入光電管，測(cè)試完畢取出樣品，并搽干凈樣品室內(nèi)殘留液體。
取拿比色皿時(shí)，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，而不能碰比色皿的光學(xué)表面。
比色皿不能用堿溶液或氧化性強(qiáng)的洗滌液洗滌，也不能用毛刷清洗，可以用污水乙醇，棉簽試搽比色皿透光面。
比色皿外壁附著的水或溶液應(yīng)用擦鏡紙或細(xì)而軟的吸水紙吸干，不能劃傷比色皿透光面。