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詳細介紹
LifeAct-TagGFP2蛋白
LifeAct-TagGFP2蛋白
應用領域
- 細胞骨架組織
- 無毒肌動蛋白可視化
- 熒光染色
- 細胞骨架動力學
- 細胞過程中的肌動蛋白動力學
- 活細胞成像和顯微鏡
技術指標
| 形成 | 凍干 |
| 存儲 | -80°攝氏度 |
| TagGFP2（Ex max / Em max） | 483/506納米 |
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請在此處找到有關肌動蛋白可視化的更多詳細信息。
在此處下載完整的“ Actin可視化”應用指南，以PDF格式。
技術特點
- 重組蛋白，凍干
- C端His標簽
- 建立活細胞和固定細胞中F-肌動蛋白染色的規(guī)程
- 出色的信噪比
- 具有出色生物相容性的活體樣品的無毒F-肌動蛋白染色
LifeAct是一種17個氨基酸的肽，來源于釀酒酵母蛋白。LifeAct可以染色活的或固定的真核細胞中的絲狀肌動蛋白（F-actin）結構。
請在此處找到有關LifeAct的詳細信息。
使用LifeAct-TagGFP2蛋白在活細胞中可視化F-肌動蛋白
LifeAct-TagGFP2蛋白非常適合快速有效地可視化活細胞中的細胞骨架。對于染色過程，您可以使用任何適用于您感興趣的細胞的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移方法。
注意：請記住，與mRNA或DNA轉(zhuǎn)染相比，蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)染后細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的實際含量通常較低。為了充分可視化細胞內(nèi)F-肌動蛋白，您應該使用高質(zhì)量的顯微鏡設備。
LifeAct-TagGFP2蛋白轉(zhuǎn)移后，Rat1成纖維細胞中F-肌動蛋白的活細胞成像（30 µg / ml，3分鐘）。
肌動蛋白細胞骨架的超分辨顯微鏡（STED）
使用LifeAct-TagGFP2蛋白，可以詳細顯示肌動蛋白的細胞骨架。在該實驗中，將固定的Rat1成纖維細胞與LifeAct-TagGFP2蛋白在µ-Slide VI 0.4 ibiTreat中孵育。進行了模擬發(fā)射損耗（STED）顯微鏡檢查，以創(chuàng)建超分辨率圖像。
使用LifeAct-TagGFP2蛋白對Rat1成纖維細胞中肌動蛋白細胞骨架的超分辨率顯微鏡檢查。顯微鏡是在STEDYCON超分辨率STED納米顯微鏡系統(tǒng)（德國哥廷根Abberior Instruments GmbH）上使用Plan-Neofluar 100x / 1.4物鏡進行的。
使用LifeAct-TagGFP2蛋白在固定細胞中觀察F-肌動蛋白
除了在活細胞中工作外，LifeAct-TagGFP2蛋白還是一種快速簡便的解決方案，可在多種固定細胞中進行高效F-肌動蛋白染色。
注意：在固定過程中，甲醇和丙酮會破壞肌動蛋白。因此，建議避免與LifeAct-TagGFP2蛋白結合使用任何含甲醇或丙酮的固定劑。
CHO-K1
HT1080
MCF7
大鼠1
用Triton X-100滲透福爾馬林固定的細胞，并在LifeAct-TagGFP2蛋白溶液（PBS中10 µg / ml）中孵育1小時。
方法比較：使用LifeAct在活細胞中可視化F-Actin
LifeAct-Plasmid | LifeAct-mRNA | LifeAct蛋白 | LifeAct- | LifeAct- | |
| 方法適用于1 | |||||
| 細胞系 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ |
| 原代細胞 | + | +++ | ++ | +++ | +++ |
| 非哺乳動物細胞 | -- | + | + | -- | -- |
| 轉(zhuǎn)染穩(wěn)定性 | |||||
| 短暫的 | 是 | 是 | 是 | 是 | 沒有 |
| 穩(wěn)定 | 是 | 沒有 | 沒有 | 沒有 | 是 |
| 協(xié)議與分析 | |||||
| 協(xié)議簡單 | +++ | ++ | ++ | +++ | +++ |
| LifeAct讀出開始 | 1-2天 | 幾個小時 | 幾分鐘 | 1-2天 | 1-2天 |
| LIFEACT讀出持續(xù)時間 | 幾天 | 幾天 | 多1天 | 幾天 | 幾天 |
| 信號強度 | +++ | +++ | + | +++ | +++ |
| 額外好處 | |||||
| 防止過度表達的 假象 | -- | + | +++ | + | + |
| 預防病毒反應 | +++ | +++ | +++ | -- | -- |
| 轉(zhuǎn)移 方法的生物相容性 | + | +++ | +++ | ++ | ++ |
| 肌動蛋白功能 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ |
| 安全考慮 | |||||
| 生物安全等級 | BSL1 | -- | -- | BSL2 | BSL2 |
1并非所有這些組合都已在所有指示的細胞類型中進行了測試。我們鼓勵您使用此表作為指導，以了解如何地使用LifeAct系統(tǒng)。
注：楊清辰發(fā)布
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