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自誘導培養(yǎng)基Auto Induction Medium原理介紹

時間:2022-5-8閱讀:4208

自誘導培養(yǎng)基Auto Induction Medium(AIM),包含LB Broth (AIM), 2x YT Broth (AIM), Terrific Broth (AIM), Super Broth (AIM)。通常,外源蛋白在細菌中表達時常使用IPTG誘導的啟動子,如Lac啟動子。當細胞密度達到理想值時,通過向培養(yǎng)基中加入IPTG的方法誘導蛋白表達。使用這個自動誘導培養(yǎng)基,不再需要監(jiān)測細胞密度和添加IPTG。葡萄糖作為半乳糖操縱子的阻遏因子阻止細菌利用α-乳糖,而被優(yōu)先代謝,促進高密度生長。一旦培養(yǎng)基中的葡萄糖被耗盡(通常發(fā)生在對數期的后期),乳糖被?-半乳糖苷酶轉換成異乳糖(葡萄糖-1,6-半乳糖),而后者作為IPTG誘導型啟動子的誘導劑,引起乳糖阻遏子從與DNA結合的位點上釋放,啟動重組蛋白的表達。對于DE3基因型的E.coli中,異乳糖使T7lac啟動子去阻遏,并誘導lacUV5啟動子表達T7 RNA聚合酶。通過這種方式,在細菌培養(yǎng)物生長到某一特定點時蛋白表達自發(fā)開始,省掉了監(jiān)測細胞密度(OD600)和添加IPTG這兩個步驟。與傳統(tǒng)IPTG誘導的蛋白表達過程相比,使用自動誘導培養(yǎng)基極大地方便和簡化了試驗流程。

自誘導培養(yǎng)基(lac啟動子)(Auto-induction Medium)產品及特點
本產品是在pET專用生長培養(yǎng)基的基礎上開發(fā)而成的,它利用E.coli自身對培養(yǎng) 基中碳源和能源的調控利用機制,實現外源蛋白在細菌達到飽和期后的自動誘發(fā)。
具有下列特點:
1. 不需添加任何IPTG或相關誘導物,節(jié)約成本。
2. 免去了密切監(jiān)控菌液密度的過程,尤其適合大規(guī)模篩選 。
3. 細菌生長密度遠高于IPTG誘導表達系統(tǒng) 。
4. 外源蛋白表達量遠遠高于IPTG誘導表達系統(tǒng)。
5. 本產品即開即用,操作簡單 。
6. 與各種細胞培養(yǎng)容器兼容(如培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)罐、深孔管、發(fā)酵罐等)。

過夜培養(yǎng)自動誘導細胞表達的培養(yǎng)基系統(tǒng),培養(yǎng)基都可以大程度上提高pET系列和其它IPTG原核誘導表達系統(tǒng)在大腸桿菌中蛋白的表達量,其最大的方便之處在于使用這種培養(yǎng)基不需要對大腸桿菌的生長密度進行檢測。因為IPTG會對細胞存在毒性,因此使用了這種不含IPTG的自動誘導體系培養(yǎng)基與傳統(tǒng)培養(yǎng)基相比可以使細胞數量和目的蛋白量都大大增加數倍。

這種培養(yǎng)基是基于F. William Studier博士的技術,使用了不同代謝成分提高細胞的生長密度,并自動誘導lac啟動子開始轉錄。Overnight Express Instant TB Medium培養(yǎng)基現在提供三種不同的成分。作為一種粉末裝TB培養(yǎng)基它可快速溶解在水中,并進行微波加熱和高壓滅菌處理。


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