當前位置：靶點科技（北京）有限公司>>技術文章>>懸浮細胞的培養細節及免疫熒光IF經驗分享
細胞培養類型可以分為貼壁細胞和懸浮細胞兩種，只有極少數類型細胞同時存在兩種狀態。
懸浮細胞是指不需要依賴支持物，可在培養基中以懸浮狀態生長的一類細胞，如淋巴細胞和大部分血液系統來源細胞。（如小鼠白血病細胞WEHI-3, 人白血病細胞K-562, HL-60）。工業上也有越來越多的貼壁傳代細胞被馴化出來，進行全懸浮的培養。目前在工業中應用的主要有SP2/0、NS0、CHO、BHK和HEK293細胞等，它們主要用于重組蛋白質生產；在獸用生物制品中常用的傳代細胞主要有采用全懸浮培養的BHK21細胞、MDCK細胞；及借助微載體懸浮培養的Vero細胞、PK細胞、ST細胞、 Marc145細胞等，每種細胞的特性都不同。
一般情況下，懸浮細胞相較于貼壁細胞的處理更加簡單一些，因為懸浮細胞傳代時無須胰酶消化。但這并不意味著懸浮細胞比貼壁細胞好養，對新手來說，反而更具挑戰性。總是會遇到各種各樣的問題：比如，為什么總是出現死細胞和細胞分化；說好了傳代很easy的，結果會出現分化；養好了凍存復蘇后又出現問題了！
養好懸浮細胞，有如下大眾經驗分享。
要點一：足夠的耐心，這是非常必要的
很多懸浮細胞在剛從凍存狀態復蘇時活力是相對較差的，此時我們需要有足夠的耐心，等待細胞完成自我修復進入對數增長期。比如THP-1（人單核細胞白血病）從解凍到恢復正常增殖往往需要7-10天的恢復期；Jurkat，Clone E6-1(人T淋巴細胞白血病細胞)復蘇后也需要5-7天才能恢復到凍存前的狀態。新手可能會在此期間放棄培養，所以，請多一點耐心哦！培養這類細胞也是培養耐心的過程呢！
要點二：接種密度的把握
一般來說，懸浮細胞接種時密度不應低于50萬個/ML，很多懸浮細胞有密度依賴，密度低導致的不增殖也是新手常見問題之一。當然，有極少數細胞在密度高時反而狀態變差，如W6/32（小鼠B細胞雜交瘤細胞）。因此，培養不了解的細胞前查找相關資料去掌握細胞特性非常重要。
要點三：換液方法及頻率
換液頻率不應該被限制得“明明白白"，細胞是活物，在一個連續培養周期內，視細胞生長狀態可分多次添加補充培養基、葡萄糖等特定營養成份，維持細胞良好的生長狀態。懸浮培養過程中，隨著細胞的增殖，原有培養基中營養物質的消耗，代謝產物的增加，細胞的活率會下降，及時補充營養物質，使細胞處于一個相對良好的生存環境。切忌頻繁離心換液。參考換液方法：
①離心全換液法
即通過離心（800-1000rpm，5min）去除全部舊的培養基，更換新鮮培養基。該方法適合“皮實“好養的懸浮細胞換液(如K562)，或者當前細胞狀態良好、密度較高導致培養基消耗較大的情況。此方法的優點是換液到位，能去除部分細胞碎片，但是同樣會對細胞造成一定程度的機械損傷。
②離心半換液法
即通過離心（800-1000rpm，5min）50%細胞懸液，更換50%體積的新鮮培養基。該方法適合比較“矯情“難養的細胞（如thp-1），或者正在調整狀態中、密度較低但碎片較多需要去除的情況。
③沉降換液法
即不使用離心機而是利用重力自然沉降的方法，將培養基與細胞分離，達到全部或部分更換新鮮培養基。但是其有應用局限性—只適合能成一定大小細胞團（否則無法自然沉降，只能低速離心）的細胞，尤其是處理依賴細胞聚集才能增殖的細胞時非常值得推薦，如NK-92、NK-92 MI、Jurkat。該方法能在換液過程中最大限度避免離心過程造成的機械損傷，同時保留聚集的細胞團，并且去除細胞碎片也較為干凈。
固定懸浮細胞，有如下私房經驗分享。
養好懸浮細胞，需要用化合物等試劑刺激懸浮細胞，或者共培養。使用免疫熒光來檢查懸浮細胞，一直給很多新手，甚至高手造成心理陰影。如何固定好懸浮細胞？如何確保不掉片？甚至如何讓懸浮細胞貼壁來做實驗？是很多實驗者的奢望。懸浮細胞固定/免疫熒光專用玻片給帶來解決方案。
如下是一些懸浮細胞固定后做的免疫熒光圖片，可以參考。
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗證碼
以上信息由企業自行提供，信息內容的真實性、準確性和合法性由相關企業負責，化工儀器網對此不承擔任何保證責任。
溫馨提示：為規避購買風險，建議您在購買產品前務必確認供應商資質及產品質量。
5
