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巨噬細(xì)胞也會(huì)表達(dá)Ly6G

時(shí)間:2024-8-29閱讀:454

2024年8月2日,Science Immunology期刊上,來(lái)自比利時(shí)列日大學(xué)的研究人員發(fā)表論文標(biāo)題為“Recruited atypical Ly6G+ macrophages license alveolar regeneration after lung injury"。新發(fā)現(xiàn)巨噬細(xì)胞群體:Ly6G陽(yáng)性非典型巨噬細(xì)胞,這是一種重要的先天性免疫細(xì)胞,在呼吸道病毒造成損傷后會(huì)定植于肺部中。這些巨噬細(xì)胞在修復(fù)肺泡方面發(fā)揮著重要作用。這一突破性發(fā)現(xiàn)有望改變我們對(duì)感染后免疫反應(yīng)的認(rèn)識(shí),并為新的再生療法打開(kāi)大門(mén)。

Ruscitti C等人在2024年7月Sci Immunol.上發(fā)表的文章中,推測(cè)招募的巨噬細(xì)胞的某些亞群可能在組織修復(fù)和再生中發(fā)揮有益作用,將重點(diǎn)放在 IAV 誘導(dǎo)的肺損傷背景下研究先前未描述的表達(dá)Ly6G(一種通常與中性粒細(xì)胞相關(guān)的標(biāo)志物)的巨噬細(xì)胞群。


Abstract

The lung is constantly exposed to airborne pathogens and particles that can cause alveolar damage. Hence, appropriate repair responses are essential for gas exchange and life. Here, we deciphered the spatiotemporal trajectory and function of an atypical population of macrophages after lung injury. Post-influenza A virus (IAV) infection, short-lived monocyte-derived Ly6G-expressing macrophages (Ly6G+ Macs) were recruited to the alveoli of lung perilesional areas. Ly6G+ Macs engulfed immune cells, exhibited a high metabolic potential, and clustered with alveolar type 2 epithelial cells (AT2s) in zones of active epithelial regeneration. Ly6G+ Macs were partially dependent on granulocyte-macrophage colony-stimulating factor and interleukin-4 receptor signaling and were essential for AT2-dependent alveolar regeneration. Similar macrophages were recruited in other models of injury and in the airspaces of lungs from patients with suspected pneumonia. This study identifies perilesional alveolar Ly6G+ Macs as a spatially restricted, short-lived macrophage subset promoting epithelial regeneration postinjury, thus representing an attractive therapeutic target for treating lung damage.


材料方法

1、動(dòng)物模型及樣品制備:

8-12周齡 C57BL/6 野生型小鼠經(jīng)鼻感染 5pfu 的 IAV H1N1 毒株P(guān)R8/34。在感染后的不同時(shí)間點(diǎn)(第0、5、10、15和20天),收獲肺并處理成單細(xì)胞混懸液。裂解紅細(xì)胞,并通過(guò)70 μm細(xì)胞過(guò)濾器過(guò)濾細(xì)胞。

2、流式檢測(cè)的細(xì)胞群體:

中性粒細(xì)胞 (Ly6G + CD11b + CD64-)肺泡巨噬細(xì)胞 (Ly6G-CD64 + SiglecF + CD11c +)單核細(xì)胞(CD64-Ly6C-和CD64-Ly6C +)炎性單核細(xì)胞 (CD64 + Ly6C +)間質(zhì)巨噬細(xì)胞樣細(xì)胞 (F4/80 + CD11b + Ly6G-SiglecF-Ly6C-CD64 +)Ly6G+ 巨噬細(xì)胞 (Ly6G + CD11b + CD64 +)

巨噬細(xì)胞也會(huì)表達(dá)Ly6G


3、細(xì)胞內(nèi)染色:

為了檢測(cè)精氨酸酶-1和骨橋蛋白,首先對(duì)細(xì)胞進(jìn)行表面標(biāo)記染色,然后固定并破膜,使用抗精氨酸酶-1和骨橋蛋白的抗體進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)染色。

4、增殖試驗(yàn):

Ki67 染色:固定細(xì)胞,進(jìn)行破膜處理,并用抗 Ki67 抗體染色以評(píng)估增殖。EdU 摻入:分析前4小時(shí)小鼠注射EdU。處理細(xì)胞進(jìn)行表面染色,然后固定,透化,并使用基于點(diǎn)擊化學(xué)的檢測(cè)試劑盒進(jìn)行 EdU 染色。

同時(shí)結(jié)合了其它技術(shù),包括單細(xì)胞 RNA 測(cè)序、細(xì)胞離心涂片和 Giemsa 染色形態(tài)學(xué)分析以及骨髓嵌合體實(shí)驗(yàn)。


實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1、流式細(xì)胞術(shù)分析可發(fā)現(xiàn)IAV感染后髓系細(xì)胞群的時(shí)間動(dòng)態(tài)變化:

中性粒細(xì)胞在感染后第5天達(dá)到峰值,到第15天恢復(fù)至基線(xiàn)水平。肺泡巨噬細(xì)胞在第5-10天期間數(shù)量部分減少,到第15天時(shí)恢復(fù)。經(jīng)典和炎性單核細(xì)胞約在第5天達(dá)到峰值。間質(zhì)巨噬細(xì)胞樣細(xì)胞數(shù)量隨時(shí)間逐漸增加。Ly6G+巨噬細(xì)胞從第5天開(kāi)始出現(xiàn),第10天達(dá)到峰值,并持續(xù)存在至少到第20天。

以下是IAV感染后髓系細(xì)胞動(dòng)態(tài)變化的簡(jiǎn)化圖示:

巨噬細(xì)胞也會(huì)表達(dá)Ly6G


這個(gè)圖表展示了通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析得到的不同髓系細(xì)胞群的時(shí)間動(dòng)態(tài)變化。值得注意的是,Ly6G+巨噬細(xì)胞在恢復(fù)期(第10-20天)出現(xiàn)并持續(xù)存在,這一現(xiàn)象暗示它們可能在組織修復(fù)和再生過(guò)程中發(fā)揮重要作用。

2、Ly6G+巨噬細(xì)胞的表型特征:

表達(dá)F4/80高、SiglecF低、CD11c低高表達(dá)CXCR4、MHC-II、CD101和CD319低表達(dá)中性粒細(xì)胞活化標(biāo)志物CD177

3、形態(tài)學(xué)特征,通過(guò)離心涂片和吉姆薩染色觀(guān)察,Ly6G+巨噬細(xì)胞呈現(xiàn)以下特點(diǎn):

腎形細(xì)胞核(類(lèi)似炎性單核細(xì)胞)細(xì)胞質(zhì)中含有大量空泡狀結(jié)構(gòu)細(xì)胞膜富含突起

4、轉(zhuǎn)錄組特征,單細(xì)胞RNA測(cè)序識(shí)別出一個(gè)不同的Ly6G+巨噬細(xì)胞群,其特征是高表達(dá):

組織蛋白酶(Ctsb、Ctsz)半乳糖凝集素(Lgals1、Lgals3)精氨酸酶-1(Arg1)骨橋蛋白(Spp1)

5、來(lái)源和增殖特性:

EdU摻入實(shí)驗(yàn)和Ki67染色表明Ly6G+巨噬細(xì)胞不處于活躍增殖狀態(tài)。使用Ms4a3CreR26LSLtdTomato和Cx3cr1GFP報(bào)告基因小鼠進(jìn)行的譜系追蹤實(shí)驗(yàn)顯示,Ly6G+巨噬細(xì)胞源自募集的單核細(xì)胞,而非局部祖細(xì)胞。

6、發(fā)育軌跡:

對(duì)單細(xì)胞RNA測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行Slingshot軌跡分析表明,Ly6G+巨噬細(xì)胞是由Ly6C+單核細(xì)胞經(jīng)過(guò)中間炎性單核細(xì)胞階段分化而來(lái)。

7、功能意義:Ly6G+巨噬細(xì)胞在促進(jìn)肺損傷后的肺泡再生中發(fā)揮重要作用。




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