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當(dāng)前位置:> 供求商機(jī)> PerkinElmer小動(dòng)物活體成像底物D-熒光素鉀鹽
更新時(shí)間:2024-11-19 21:00:07
有效期:2024年11月19日 -- 2025年5月19日
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PerkinElmer 提供兩種用于體外(in vitro), 體內(nèi)( in vivo)和離體(ex vivo)生物發(fā)光成像的熒光素酶底物:D-熒光素和腔腸素 H。D-熒光素是 Firefly 熒光素酶(如 Red-FLuc)的底物,可與我們的 Bioware Ultra 結(jié)合使用使用我們的 RediFect™ Red-FLuc 和 Red-FLuc-GFP 慢病毒顆粒轉(zhuǎn)染的生物發(fā)光腫瘤細(xì)胞系或細(xì)胞,用于體外、體內(nèi)或離體成像。腔腸素 H 是 Renilla 和 Gaussia 熒光素酶的底物,可用于使用我們的 RediFect Green RenLuc 慢病毒顆粒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞進(jìn)行體內(nèi)成像,或者當(dāng)這些熒光素酶中的任何一種用作報(bào)告基因時(shí)。相應(yīng)的底物對(duì)于體外、體內(nèi)或離體的生物發(fā)光可視化是必需的。
在小鼠或其他小動(dòng)物模型中建立表達(dá)螢火蟲熒光素酶( firefly luciferase)、海腎熒光素酶(Renilla luciferase)或高斯熒光素酶(Gaussia luciferase)的生物發(fā)光細(xì)胞系后,注射熒光素或腔腸素底物。然后,生物發(fā)光報(bào)告基因使用底物在細(xì)胞系內(nèi)產(chǎn)生光,從而使小鼠(或其他)模型內(nèi)的生物發(fā)光細(xì)胞可視化。這種發(fā)光可以使用適當(dāng)?shù)?2D 或 3D 成像儀進(jìn)行可視化和測(cè)量。
背景介紹
熒光素(Luciferin)是一種在各種生物發(fā)光生物的細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的化學(xué)物質(zhì)。當(dāng)熒光素(Luciferin)在熒光素酶(Luciferase)和 ATP 的催化作用下被氧化時(shí),就會(huì)產(chǎn)生光。由于反應(yīng)依賴于 ATP,它使研究人員能夠確定能量或生命的存在。熒光素酶(Luciferase)是生物體內(nèi)催化熒光素(Luciferin)或者脂肪醛氧化發(fā)光的一類酶的總稱。熒光素酶可以從細(xì)菌,螢火蟲,海星等提取出來。螢火蟲熒光素(fireflyluciferase)由于發(fā)射光譜的特性,其是一種特別好的體外成像報(bào)告系統(tǒng)。
雙熒光素酶通常是指螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素。其中熒火蟲熒光素是從甲蟲(Photinus pyralis)中分離得到,分子量為61kDa;而海腎(Renilla)熒光素酶則是從海腎(Renilla reniformis)中分離,分子量為36kDa。這兩種酶的區(qū)別之一是他們的底物和輔因子不同:螢火蟲熒光素酶需要熒光素、氧氣、ATP和鎂離子同時(shí)存在才能發(fā)光;而海腎熒光素酶僅需要腔腸素(coelenterazine)和氧氣。螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶的區(qū)別之二是發(fā)光的顏色不同:螢火蟲熒光素酶產(chǎn)生的光顏色呈現(xiàn)黃綠色,波長(zhǎng)550-570nm;而海腎熒光素酶產(chǎn)生藍(lán)光,波長(zhǎng)480nm。正是由于這兩種酶的底物和發(fā)光顏色不同,所以在雙報(bào)告實(shí)驗(yàn)中得到廣泛應(yīng)用。
熒光素可以以多種方式使用。它可用于各種體外測(cè)定,其中可以使用光度計(jì)或閃爍計(jì)數(shù)器監(jiān)測(cè)光的產(chǎn)生。它還可以用于監(jiān)測(cè)體內(nèi)的光產(chǎn)生,并且可以使用 PerkinElmer 的 IVIS® 成像平臺(tái)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。由于熒光素可以穿透細(xì)胞膜,因此可以監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)化細(xì)胞的熒光素酶活性。
檢測(cè)原理
螢火蟲螢光素酶是一種胞內(nèi)蛋白,大小為61KDa。在氧氣、ATP和鎂離子同時(shí)存在的條件下,催化底物螢火蟲螢光素氧化,生成氧化螢光素,并發(fā)出黃綠色光,其發(fā)光波長(zhǎng)為560nm。
海腎螢光素酶也是一種胞內(nèi)蛋白,大小為36KDa。只需要氧氣就可以催化腔腸素,氧化生成高能產(chǎn)物coelenteramide,并發(fā)出藍(lán)光,其發(fā)光波長(zhǎng)為465nm。
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