蘇州千舍生物教你如何查詢細胞資料和培養基相關知識
培養基是細胞培養中*的營養成分,但是基礎的培養基卻給實驗者帶來了一系列的問題。
別小看細胞培養,這里可蘊含著大學問。
1.怎樣查到一個特定細胞株的相關知識和培養條件?
ATCC(American Type Culture Collection)收集了絕大多數細胞的詳細資料。打開ATCC網頁的Cells and hybridomas鏈接,輸入細胞名稱就可以搜索ATCC的細胞數據庫。數據庫中有每一種細胞的詳細描述,包括細胞的來源,培養和凍存條件,以及相關文獻等資料。或者在鏈接web.expasy.org/cellosaurus/ 中輸入細胞代號查詢相關資料。
2.如何選用特殊細胞系培養基?
培養某類型細胞沒有固定的培養條件。MEM中培養的細胞,很可能在DMEM或M199中同樣容易生長。總之,shou 選MEM、DMEM做貼壁細胞培養;RPMI1640做懸浮細胞培養;各種目的無血清培養shou 選AIMV培養基SFM。新的細胞培養時要詳查資料。
3.自己新配制的液體培養基能保存多久?
我們建議將新配制的培養基放置于4℃,避光保存盡量在一周內使用完畢。培養基越新鮮越好。
4.培養基中添加了血清和抗生素后,可長期保存嗎?
一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時,您應該在一到兩周內使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。
5.培養基中是否須添加抗生素?
除了特殊篩選系統外,一般正常培養狀態下,培養基中不應添加任何抗生素。
為防止細菌、真菌污染,可以加入青霉素-鏈霉素雙抗溶液,其培養基中的終濃度為青霉素100U/ml,鏈霉素為100ug/ml。
6.液體培養基可以放-20℃保存嗎?
不可以!因為在-20℃下,培養基中的鹽容易析出,培養基融化后,有的鹽可能無法重新溶解,從而導致培養基滲透壓降低,培養細胞時,細胞容易破裂而死亡。
7.為何培養基保存于4℃冰箱中,顏色會偏暗紅色,且pH值越來越偏堿性?
培養基保存于4℃冰箱中, 培養基內之CO2 會逐漸溢出,造成培養基越來越偏堿性。而培養基中之酸堿指示劑(通常為phenol red) 的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。培養基偏堿之結果, 將造成細胞生長停滯或死亡。若培養基偏堿時, 可以通入無菌過濾之CO2, 以調整pH 值。
8.為什么你公司液體培養基1640顏色發黃,是pH值不對嗎?
不是。因為配方原因,1640為堿酚紅型,其中酚紅的濃度只有DMEM的四分之一,所以是因為酚紅濃度低,而非PH值低。
9.培養液pH是怎樣影響細胞生長的?
由于大多數細胞適宜PH值為7.2-7.4,偏離此范圍對細胞將產生有害的影響。各種細胞對PH值要求也不*相同,原代細胞培養一般對PH值變動耐受差,無限細胞系耐受力強。 但總體來說,細胞耐酸性比耐堿性強一些,偏酸環境中更有利于細胞的生長。因此,配制培養用液時可把液體的PH值稍微調的偏酸一些。液體在經過0.1um或0.2um濾膜過濾時,PH值會向上浮動0.2左右。
10.培養液滲透壓是怎樣影響細胞生長的?
當細胞內、外環境的分子濃度不同時就會產生滲透壓。這種情況下,水分通過滲透流入或流出細胞,從而改變細胞的內環境。高滲透壓迫使水分從細胞中擴散出來導致細胞收縮,這種情況會使DNA和蛋白遭到破壞,細胞周期停滯以及終使細胞死亡;反之,低滲透壓使水分流入細胞內,使細胞腫脹破裂。
11.為什么有客戶要求培養基中不含酚紅?
研究表明,酚紅可以模擬固醇類激素的作用(特別是雌激素)。為避免固醇類反應,細胞培養,尤其是哺乳類細胞時,用不加酚紅的培養基。由于酚紅干擾檢測,一些研究人員在做流式細胞檢測時,不使用加酚紅的培養基。
12.酚紅的作用是什么?
酚紅在培養基中被用來作為PH值指示劑:中性時為紅色,酸性時為黃色,堿性時為紫色。
13.你公司干粉培養基里含NaHCO3嗎?
所有的干粉培養基中都不含NaHCO3 。請依據說明書或包裝袋上的標注,在干粉培養基*溶解后添加NaHCO3 。
14.NaHCO3的作用是什么?
與CO2一起形成緩沖系統,保持培養基PH值穩定。
15.我們實驗室培養箱CO2濃度一直以來都是5%,這樣可以嗎?
當然不可以,不同的培養基要求添加NaHCO3的量不一樣,如DMEM要求添加3.7g/L,為了保持PH值穩定,必須用高濃度的CO2平衡,一般不低于8%,而1640等要求添加NaHCO3 2.2g/L,還有些培養基要求添加更少,那么這些培養基就要求較低的濃度平衡,一般是5%。
16.培養基中丙酮酸鈉的作用是什么?
丙酮酸鈉可以作為細胞培養中的替代碳源,盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,但是如果沒有葡萄糖的話,細胞也可以代謝丙酮酸鈉。
丙酮酸鈉的貯存液濃度一般為50mM,-20℃保存,培養基中的終濃度為1mM.
17.谷氨酰胺的作用是什么?
幾乎所有的細胞對谷氨酰胺都有較高的要求。谷氨酰胺脫掉氨基后,可作為培養細胞的能量來源,參與蛋白質的合成和能量代謝。在缺少谷氨酰胺時,細胞生長不良而死亡。所以,各種培養液中都含有較大量的谷氨酰胺。
谷氨酰胺在溶液中很不穩定,應置-20℃冰凍保存,用前加入培養基中。加有谷氨酰胺的液體培養基4度冰箱儲存兩周以上時,應重新加入原來量的谷氨酰胺。
18.可否使用與原先培養條件不同的培養基?
不能!!每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養基,若驟然使用和原先提供之培養條件不同的培養基,細胞大多無法立即適應,造成細胞無法存活。
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MC38小鼠結腸癌細胞
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Hyclone胎牛血清Sv30087.01
Hyclone胎牛血清Sv30087.02
Hyclone胎牛血清SH30084.03
Hyclone胎牛血清 SH30406.02
Hyclone胎牛血清 SH30406.05
Hyclone胎牛血清 SH30396.03
Hyclone胎牛血清 SH30070.03
Hyclone特級胎牛血清 SH30070.03E
Hyclone胎牛血清 SH30370.03
活性炭/葡聚糖胎牛血清 SH30068.03
活性炭/葡聚糖處理胎牛血清,熱滅活 SH30068.03HI
馬血清SH30074.03
烏拉圭胎牛血清 SV30087. 03
Hyclone胎牛血清SH30071.03
Hyclone胎牛血清SV30160.03
胎牛血清FBS SFBS
新生牛血清 SNCS
PAA 普通胎牛血清FBS A15-101
PAA 優等胎牛血清FBS A15-151
BI優等胎牛血清 04-001-1ACS
BI ES級別胎牛血清 04-002-1A
BI 間充質胎牛血清 04-400-1A
Corning胎牛血清 35-076-CV
PAN胎牛血清FBS P30-3302
PAN胎牛血清FBS ST30-3302
PAN ES級別胎牛血清 ST30-2602
PAN胎牛血清Plus ST30-3302P
NTC優等胎牛血清 SFBE
Gemini優等胎牛血清 900-108
Gemini特級胎牛血清 100-500
Gemini科研用人AB血清100-512
TCB胎牛血清 101ZC
Sigma 特級胎牛血清 F2442
Sigma正常人AB血清 H4522
SBI 無外泌體血清 EXO-FBS-50A-1
胎牛血清10270-106、10099-141、10091-148、10099-133、10100-147、16010159、A31608-02、16050-122、30067334、10437-028等胎牛血清
雙抗 15140-122、SV30010
胰酶 25200-056、SH30042.01
GIBCO 胰酶 25200-072
DMEM高糖培養基 C11995500BT
DMEM低糖培養基 C11885500BT
PBS C10010500BT
1640培養基 C11875500BT
DMEM/F12 C11330500BT
MEM培養基 C11095500BT
α-MEM C12571500BT
DMEM低糖 SH30021.01
DMEM高糖 SH30022.01、SH30243.01
DMEM/F-12 1:1 SH30023.01
MEM/EBSS SH30024.01
PBS緩沖液 SH30256.01
α-MEM SH30265.01
RPMI-1640 SH30809.01
DPBS SH30028.02
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