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蘇州千舍生物教你如何解決“細(xì)胞空泡化”
“細(xì)胞空泡化”在細(xì)胞培養(yǎng)中也是一個(gè)常見(jiàn)問(wèn)題,它的出現(xiàn)原因有多種,實(shí)驗(yàn)人員碰到往往會(huì)很頭疼。
在文章中小給列舉出了可能出現(xiàn)這種情況的原因,方便大家進(jìn)行分析選擇解決的方法。
一、可以引起細(xì)胞空泡化出現(xiàn)的原因有哪些?
1.細(xì)胞老化
原代細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中經(jīng)常出現(xiàn)這樣的情況,是有些細(xì)胞處于終末分化狀態(tài),不會(huì)再分裂,時(shí)間長(zhǎng)了就會(huì)空泡化而死亡。
傳代細(xì)胞出現(xiàn)這種狀況比較少見(jiàn),出現(xiàn)的原因一般都是因?yàn)榧?xì)胞傳代次數(shù)過(guò)多,老化嚴(yán)重。
2.PH值
培養(yǎng)液的PH值與細(xì)胞正常所需PH值差別太大。
3.胰酶消化
胰酶消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng),會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)受損,有時(shí)也會(huì)出現(xiàn)這種情況。除此之外,還有一個(gè)大家容易忽略的問(wèn)題,在香港的一家科研機(jī)構(gòu)表明如果消化細(xì)胞吹打時(shí)力度過(guò)大,產(chǎn)生太多氣泡,長(zhǎng)期存在也會(huì)出現(xiàn)這種現(xiàn)象。
4.自噬
細(xì)胞缺乏營(yíng)養(yǎng)導(dǎo)致饑餓誘導(dǎo)形成自噬也會(huì)形成空泡化,但是這種空泡在光學(xué)顯微鏡下是看不到的,只有在電鏡下才能觀察到。
5.細(xì)胞代謝
在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,由于血清濃度不夠、藥物作用、外界刺激等情況下導(dǎo)致細(xì)胞代謝出現(xiàn)問(wèn)題,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀況下會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞空泡化的情況。
6.污染
衣原體感染:一旦一些細(xì)胞出現(xiàn)空泡化,繼續(xù)培養(yǎng),空泡范圍會(huì)擴(kuò)大,即使傳代后也如此,出現(xiàn)這種情況,細(xì)胞基本無(wú)法挽救。后來(lái)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),此種細(xì)胞存在衣原體的感染。
支原體污染:支原體污染在不嚴(yán)重的時(shí)候細(xì)胞是沒(méi)有什么明顯癥狀的,而且也無(wú)法通過(guò)光學(xué)顯微鏡觀察到,只有在嚴(yán)重的時(shí)候會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)變差,出現(xiàn)細(xì)胞空泡化的現(xiàn)象,細(xì)胞膜上也會(huì)出現(xiàn)小黑點(diǎn)附著。
病毒污染:在文獻(xiàn)上也有說(shuō)病毒污染也會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)空泡化的情況。
Hyclone胎牛血清SH30084.03 、Hyclone胎牛血清SH30406.02 、Hyclone胎牛血清SH30406.05 、Hyclone胎牛血清SH30396.03 、Hyclone胎牛血清SH30070.03
特級(jí)胎牛血清 SH30070.03E 、Hyclone胎牛血清 SH30370.03 、活性炭/葡聚糖胎牛血清 SH30068.03 、活性炭/葡聚糖處理胎牛血清,熱滅活 SH30068.03HI 、馬血清SH30074.03 、烏拉圭胎牛血清 SV30087. 03 、Hyclone胎牛血清SH30071.03 、Hyclone胎牛血清SV30160.03。
BOVOGEN胎牛血清 SFBS 、BOVOGEN新生牛血清 SNCS。
PAA 普通胎牛血清FBS A15-101 、PAA 優(yōu)等胎牛血清FBS A15-151。
BI優(yōu)等胎牛血清 04-001-1ACS 、BI ES級(jí)別胎牛血清 04-002-1A 、
BI 間充質(zhì)胎牛血清 04-400-1A 。
Corning胎牛血清 35-076-CV。
PAN胎牛血清FBS P30-3302 、PAN胎牛血清FBS ST30-3302 、PAN ES級(jí)別胎牛血清 ST30-2602 、PAN胎牛血清Plus ST30-3302P 。
NTC優(yōu)等胎牛血清 SFBE。
Gemini優(yōu)等胎牛血清 900-108 、Gemini特級(jí)胎牛血清 100-500 、Gemini科研用人AB血清100-512 。
TCB胎牛血清 101ZC。
Sigma 特級(jí)胎牛血清F2442 、Sigma正常人AB血清 H4522 。
SBI 無(wú)外泌體血清 EXO-FBS-50A-1
胎牛血清盒裝A31608-02、馬血清16050-122。
雙抗15140-122、SV30010 、胰酶 25200-056、SH30042.01 、GIBCO 胰酶 25200-072。
MCF7/Taxol人乳腺癌紫杉醇耐藥株
HCT8/5-fu 人回腸直腸腺癌細(xì)胞五氟尿嘧啶耐藥株
LOVO/5-FU 人結(jié)腸癌細(xì)胞五氟尿嘧啶耐藥株
HCT116/L人結(jié)腸癌奧沙利鉑耐藥細(xì)胞
HL60/ADR人早幼粒急性白血病細(xì)胞耐阿霉素株
PC9GR(PC9R)人肺癌細(xì)胞耐吉非替尼
LOVO/ADR人結(jié)腸癌細(xì)胞阿霉素耐藥株
HNE1/DDP人鼻咽癌細(xì)胞順鉑耐藥株
SGC7901/5-fu人胃癌細(xì)胞五氟尿嘧啶耐藥株
A549/DDP人肺癌細(xì)胞順鉑耐藥株
MCF-7/DDP人乳腺癌細(xì)胞順鉑耐藥株
A549/ADR人肺癌細(xì)胞阿霉素耐藥株
SGC7901/DDP人胃癌細(xì)胞順鉑耐藥株
SKOV3/DDP人卵巢癌細(xì)胞順鉑耐藥株
HELA/DDP人宮頸癌耐順鉑細(xì)胞株
NCI-H1650 人肺支氣管癌細(xì)胞
RT4 人膀胱移行細(xì)胞乳頭瘤 、SK-N-MC 人神經(jīng)上皮瘤細(xì)胞
SK-N-SH 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 、SW982 人滑膜肉瘤細(xì)胞
T98G 人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 、U251MG(KO) 人類星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞
U266 人骨髓瘤細(xì)胞 、VCAP 人前列腺癌細(xì)胞
hTERT-HPNE 人胰腺導(dǎo)管細(xì)胞 、ES-2 人卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞
NCI-H1650人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 、H460 人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞
HACAT 人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞 、HCT116 人結(jié)腸癌細(xì)胞
HEK293 人胚腎細(xì)胞 、HEPG2 人肝癌細(xì)胞
HGC27 人胃癌細(xì)胞(未分化) 、HT-29 人結(jié)腸癌細(xì)胞
HUVEC 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 、KYSE150人食道癌細(xì)胞
L02(HL7702)人正常肝細(xì)胞 、LOVO 人結(jié)腸癌細(xì)胞
MCF-10A人正常乳腺上皮細(xì)胞 、MCF7人乳腺癌細(xì)胞
LX-2 人肝星狀細(xì)胞 、MDA-MB-468人乳腺癌細(xì)胞
二、遇到細(xì)胞空泡化我們應(yīng)該如何解決?
1.如果是因?yàn)榧?xì)胞老化的原因,可以通過(guò)復(fù)蘇代數(shù)靠前的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。
2.如果是培養(yǎng)液PH的問(wèn)題,可以通過(guò)更換培養(yǎng)液調(diào)整到合適的PH值,再進(jìn)行培養(yǎng)。
3.在傳代時(shí),要選用合適濃度的胰酶和選取適當(dāng)?shù)南瘯r(shí)間進(jìn)行消化,在操作時(shí)避免吹打太過(guò)用力出現(xiàn)太多氣泡。
4.要保證細(xì)胞培養(yǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)充足,可以通過(guò)增加血清濃度和在培養(yǎng)基中加入谷氨酰氨解決。
5.盡量使用質(zhì)量好和渠道正規(guī)的胎牛血清,因?yàn)檫@樣的血清營(yíng)養(yǎng)豐富且外源刺激因子少,可以有效的避免出現(xiàn)這類問(wèn)題。
6.在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)要嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作,操作時(shí)要規(guī)范,減少污染的可能性。可以通過(guò)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞是否污染,對(duì)于已經(jīng)污染的細(xì)胞滅菌后直接處理,避免污染其他細(xì)胞。
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