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蘇州千舍生物科技有限公司

蘇州千舍生物小課堂:“胎牛血清知多少”

時間:2020-4-9閱讀:1349
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?胎牛血清知多少?

血清是血液凝固析出的淡黃色透明液體,是血漿去除纖維蛋白原后的混合物。主要成分包括蛋白質、氨基酸、糖類和維生素、多肽(如生長因子、胰島素、促生長激素)等。血清是細胞培養過程重要的營養物質,同時也對細胞起到一定的保護作用。

?胎牛血清重復凍存和解凍

經過5次解凍/凍存循環的血清在細胞生長性能、生化分析數據和濁度方面沒有明顯的變化,我們認為血清經多次解凍/凍存循環(可達5次)之后,不會影響細胞的生長。雖然測定數據顯示,經過多達5次解凍/凍存血清性能并未出現明顯的下降,但反復凍融會造成血清的沉淀增多,給后續處理帶來麻煩,我們建議血清的解凍/凍存次數越少越好。

?胎牛血清儲存和使用方法

我們建議血清儲存在-10℃或更低溫度條件下。產品效期是基于-10℃儲存條件的穩定性研究。然而,研究表明儲存在-80℃下的血清,在性能方面也沒有任何變化,但我們建議不要在-80℃條件下儲存,解凍時巨大的溫差會導致更多沉淀的產生。一旦解凍,血清可在2-8℃條件下儲存6周,且維持產品質量。如果解凍之后的血清儲存時間大于6周,我們建議分裝成合適的體積并重新凍存。

?胎牛血清解凍方法

首先將凍存的血清移到2-8℃的冰箱中,過夜;于37℃水浴,間歇性搖晃混勻底部的溶解物。解凍之后的血清不要長時間放置在37℃下。若血清沒有混勻且放置于高于40℃的水浴中,底部的蛋白會變性形成沉淀。不推薦高溫解凍血清。在解凍或長時間儲存之后,血清中會出現渾濁物和絮狀物。在解凍過程中,需不斷的搖晃混合以阻止形成梯度及沉淀。由于血清的不同成分解凍速率不同,當解凍時,若無混合操作,會形成一個梯度。如果血清一直保持此梯度狀態,隨后會形成沉淀。

?后再給大家帶點福利,認清血清沉淀的“真面目”:

1、用于細胞培養的胎牛血清及其它血清產品存在各種類型的沉淀。除了膽固醇和一些蛋白沉淀之外,血清中也會含有纖維蛋白和磷酸鈣。雖然沉淀可引起初始問題,但在細胞培養應用方面,沉淀不會對血清的性能產生影響。

2、纖維蛋白

清中的纖維蛋白通常為肉眼可見的較大物質(可達1-2 mm)。由于血清在低溫條件下收集并迅速加工處理,導致一些纖維蛋白原(纖維蛋白的前體)仍存在于溶液中。在過濾之后,血清中的纖維蛋白凝固并沉淀。

3、磷酸鈣

磷酸鈣也是血清產品中常見的沉淀,通常表現為云狀物。倒置顯微鏡觀察,發現許多小黑點。由于布朗運動,這些黑點可自由移動。

磷酸鈣沉淀物通常被誤認為微生物污染。在37℃孵育之后,血清中的磷酸鈣沉淀物會增加。因此,我們建議不要直接用37℃孵育的血清測試無菌性。將1 mL的待測血清直接傾倒于細菌瓊脂平板(例如胰酪蛋白胨大豆瓊脂),37℃培養之后觀察菌落的生長情況。油鏡(放大1000倍)下觀察革蘭氏染色,判斷是否污染。

?細胞生長

測試及經驗表明,沉淀不會改變血清作為培養基添加物的性能。這已經被客戶及其它廠家證實。

過濾

如果血清中含有大量的沉淀,我們不建議進行過濾血清。若您欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管中,以400g稍微離心,上清液可接著加入培養基內一起過濾。

沉淀物的控制

血清中的沉淀很難預測和阻止,沉淀不會改變血清的性能,但在正確的儲存和使用操作會降低血清中沉淀的析出。

如下條件會增加沉淀:

  •血清熱滅活;

  •37℃孵育;

  •重復凍存與解凍操作;

  •解凍工程中為未混合;

  •γ-輻照;

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