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PANC10.05細胞,人胰腺癌細胞
含STR鑒定,千舍生物,現貨供應!
PANC10.05細胞,人胰腺癌細胞特性
1) 來源:胰腺
2) 形態:上皮細胞樣,貼壁生長
3) 含量:>1x106
4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5) 規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
運輸和保存:可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式:(1)干冰運輸,收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇;(2)存活細胞,收到后應繼續生長,傳代達到細胞生長狀態良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
收到細胞后請拍照,3天內如果發現污染,請及時拍照與我們聯系。
細胞用途:僅供科研使用。
細胞接收后的處理:
1) 收到細胞后,請檢查發貨培養瓶的狀況,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯系我們。
2) 在顯微鏡下確認細胞生長狀態時,在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行,能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態請在10X和20×物鏡下,同時給剛收到的細胞拍照,(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存,作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態的依據。
3) 觀察好細胞狀態后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h。
4) 貼壁細胞:在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現象,如發現貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長,可將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基的原培養瓶中(或新的培養瓶中)。
5) 懸浮細胞:T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中(加入按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基)。
6)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。 收到細胞后一次傳代建議1:2傳代 。
細胞培養步驟
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備1640 基礎培養基,優質胎牛血清15%,P/S 1 %
牛胰島素0.01mg/ml。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
注:一次傳代推薦傳代比例為1:2,以后傳代比例可根據客戶需要自己決定。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。
下面T25瓶為類;
1,細胞凍存時,棄去培養基后,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,細胞變圓脫落后,加入1ml含血清的培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
2,4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞,根據細胞數量加入血清和DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存1ml細胞懸液,注意凍存管做好標識。
3,將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
PANC10.05細胞,人胰腺癌細胞收到注意事項:
1. 收到細胞后,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
關于細胞的復蘇需要注意幾點:
A. 整個復蘇過程盡量手腳麻利一些,戰線拉得太長可能影響復蘇效果;
B. 由于“化冰”這一步里凍存管與水溫差太大,尤其是液氮里來的凍存管,放到水里可能會造成翻江倒海的既視感,所以,如果有些萌妹紙害怕的話,可以用鑷子夾住凍存管往水里摁,這樣即使有炸裂的情況也會有水做緩沖;
C. 取凍存管時要謹防凍傷,尤其是夏天,盡管熱也好穿長袖白大褂,一些不經意的動作可能會把你的小鮮肉“粘”到冰箱門上
D. 離心這一步也可以在凍存管里的冰融化后直接進行,也就是直接把凍存管離心,離心后棄去原來的凍存液,然后直接加*培養基重懸細胞,接著把細胞轉到培養皿/瓶里培養。這種方法也許不能將DMSO清除得很干凈,但是就本俠的現有經驗來看,似乎影響不大。更有甚者,冰化完后干脆不離心,也不洗DMSO,直接用凍存液重懸了細胞就放到培養皿/瓶,加*培養基混勻就放培養箱了,第二天來換個液就當一切都沒發生過,足夠、大氣、上檔次!童鞋們如果夠懶,也可以嘗試這種“懶人法”;
E. 復蘇第二天記得去看看細胞呀,如果狀態還不錯的話就說明復蘇成功啦;
后本俠還是要嘮叨一點細胞培養箱的重要性,如果培養箱不給力,就不要怪細胞不給面子。培養箱的道道很多,有機會本俠會出番外篇專門講培養箱,這兒呢就簡單說一些比較重要的注意點:1、培養箱里的水盤要一直有水,不然細胞會干死;2、培養箱上顯示的二氧化碳濃度要保持在5%,不然會導致PH異常,影響細胞生長;3、定期用酒精等擦洗培養箱內部架子、水盤,防止污染發生。
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