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當(dāng)前位置:蘇州千舍生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>培養(yǎng)RAW264.7細(xì)胞常見問題及原因分析
在日常培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)RAW264.7細(xì)胞容易出現(xiàn)的問題主要為以下幾種:
1.復(fù)蘇不易成功2.細(xì)胞形態(tài)變異明顯3.消化困難4.細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢,當(dāng)你的細(xì)胞培養(yǎng)遇到上述瓶頸,不妨試一試以下幾種解決辦法。
1、復(fù)蘇難以成功
原因:RAW264.7對(duì)空間十分敏感,復(fù)蘇密度太高,細(xì)胞增殖太快,加劇細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)缺失,加速細(xì)胞老化。
解決辦法:T75培養(yǎng)瓶復(fù)蘇細(xì)胞數(shù)量控制在104~105
2、細(xì)胞變異明顯
原因:細(xì)胞吞噬抗原過多、培養(yǎng)環(huán)境惡劣都會(huì)促使該細(xì)胞呈現(xiàn)梭形、長(zhǎng)梭形
解決辦法:改善細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境,例如與細(xì)胞接觸的玻璃器皿均高溫滅菌,換flask培養(yǎng)瓶,采用一次性器具,使用質(zhì)量較高的胎牛血清
3、消化困難
原因:細(xì)胞老化后,細(xì)胞偽足多且長(zhǎng),使細(xì)胞難消化,使用胰酶或細(xì)胞刮會(huì)對(duì)細(xì)胞損傷較大
解決辦法:無(wú)需胰酶使用吸管重復(fù)吹打,可消化大部分正常狀態(tài)的細(xì)胞;但若細(xì)胞為“長(zhǎng)腳"狀態(tài),即使加入胰酶消化超過10min,也難以消化下來(lái),勉強(qiáng)消化,對(duì)后續(xù)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)也有較大影響。
4、生長(zhǎng)緩慢
原因:支原體污染會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢,甚至難以貼壁
解決辦法:定期進(jìn)行支原體檢測(cè),如發(fā)現(xiàn)支原體污染,即刻使用支原體去除試劑
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