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細胞培養做為生物學研究最基礎的技術之一,可以說是滲透科研界的方方面面。工欲善其事,必先利其器。細胞好不好,就看你懂不懂細胞培養的各種技術了。
? 原代培養
從原代組織中分離細胞的常用的方法是酶解法(胰蛋白酶和膠原酶)。
用無菌的解剖刀和剪子將組織剪成3~4mm小片,用平衡液(無鈣鎂離子)清洗組織碎片后去除上清液,并加入0.25%的胰蛋白酶(Trypsin,100mg組織加入1ml胰蛋白酶)或者膠原酶(Collagenase,50~200單位/ml),孵育4-18h。離心取上清后,用平衡液清洗幾次后,用*培養基懸浮細胞,進行培養。
? 傳代培養
依據細胞生長的特點,傳代方法有3種:
1. 懸浮生長細胞傳代(離心法)
將懸浮細胞離心(1000 rpm, 3 min)去上清,收集沉淀物加新培養基,混勻后進行傳代培養。
2. 半懸浮生長細胞傳代(直接吹打法)
此類細胞(如Hela細胞)部分貼壁,但黏貼不牢,可用直接吹打法使細胞從瓶壁上脫落下來,進行傳代。
3. 貼壁生長細胞傳代(酶消化法)
去除瓶內培養液后,加入1-2ml 0.25%的胰蛋白酶液(以消化液覆蓋整個瓶底為準)37℃靜置2-10min(顯微鏡下動態監測)。移去蛋白酶液,加入培養液反復吹打瓶壁細胞,離心將細胞沉淀用培養液制成細胞懸液。吸取1/10—1/40細胞懸液,接種于含有適量新鮮培養液的新培養瓶中進行傳代培養。
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細胞培養是一個不斷進步的過程,在平時做好積累,量變才會有質變。
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