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當(dāng)前位置:蘇州千舍生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢的原因
一.個(gè)別人的培養(yǎng)體系出現(xiàn)問(wèn)題
1.檢查你所培養(yǎng)的細(xì)胞是否存在污染。
(a) 如果培養(yǎng)細(xì)胞未添加抗生素(必須添加!),細(xì)胞污染則是不可避免的。
1)用肉眼和顯微鏡進(jìn)行檢查
2)如果細(xì)胞被污染則要棄掉。
(b)由于支原體污染不容易覺(jué)察到,因此必須定期檢測(cè)
(c)檢測(cè)可能污染的途徑和原因
2.檢查你用于培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基和血清(例如:是否批次不同或廠商不同)。如果你常規(guī)使用的是粉劑或10X儲(chǔ)存液,而現(xiàn)在購(gòu)買的培養(yǎng)基更換為1X液體,而隨后證明問(wèn)題就出自于此,處理方法請(qǐng)參見(jiàn)下則分享內(nèi)容。
3.如果問(wèn)題與培養(yǎng)基無(wú)關(guān),那么很可能還是細(xì)胞的問(wèn)題。
(a)復(fù)蘇另一支凍存的細(xì)胞,并且與正在培養(yǎng)的細(xì)胞加以比較。兩種細(xì)胞的培養(yǎng)應(yīng)分開(kāi),以免在培養(yǎng)之初就產(chǎn)生污染。隨后按(b) ~ (d) 步的方法做排查:
(b)對(duì)傳代培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù),并繪制生長(zhǎng)曲線與以前培養(yǎng)該細(xì)胞的資料進(jìn)行比較,檢在是否有下列改變:
1)傳代時(shí)是否接種密度過(guò)低。
2)細(xì)胞傳代是否過(guò)于頻繁。
3)傳代前細(xì)胞平臺(tái)期是否過(guò)長(zhǎng)。
(c)是否更換了胰蛋白酶或其他分離劑的批號(hào)?檢查批號(hào)和供應(yīng)商。
(d)是否細(xì)胞分離過(guò)程中嚴(yán)重?fù)p傷了細(xì)胞?應(yīng)檢測(cè):
1)胰蛋白酶(其他消化試劑)消化時(shí)間是否過(guò)長(zhǎng)。
2)消化液的濃度和活性是否過(guò)高、過(guò)強(qiáng)。
3)胰蛋白酶消化時(shí)、孵箱溫度是否過(guò)高。
4)吹打消化細(xì)胞時(shí)是否過(guò)于用力。
5)細(xì)胞是否對(duì)EDTA過(guò)于敏感(如果添加了EDTA),
6)胰蛋白酶稀釋是否有誤。
7)是否使用了一批劣質(zhì)的胰蛋白酶消化液。
二.問(wèn)題較為普遍,其他人也遇到同樣的困難
檢查共用的設(shè)備和試劑
溫室和孵箱溫度
1.溫度和溫度設(shè)定不準(zhǔn)。
(a)自動(dòng)調(diào)溫器損壞。
(b)開(kāi)關(guān)孵箱門(mén)過(guò)于頻繁。
(c)孵箱門(mén)未關(guān)緊。
(d)風(fēng)扇損壞造成散熱不均。
用便攜式溫度表重新標(biāo)定孵箱溫度。
2.孵箱濕度不能維持
(a)水盤(pán)中未加水,
(b)孵箱有滲漏。
(c)開(kāi)關(guān)孵箱門(mén)過(guò)于頻繁,
(d)在Petri培養(yǎng)皿中放置一定量的PBSA,每日稱重,以檢查蒸發(fā)率。
3.孵箱的C02濃度不準(zhǔn)
(a)開(kāi)關(guān)孵箱門(mén)過(guò)于頻繁。
(b)CO2控制器出現(xiàn)問(wèn)題。
4.用預(yù)先標(biāo)定的培養(yǎng)基監(jiān)測(cè)箱體內(nèi)的PH。
5.用CO2探頭(carborite)檢測(cè)孵箱環(huán)境。
6.用標(biāo)準(zhǔn)混合氣重新標(biāo)定零值和CO2實(shí)際值。
三.實(shí)驗(yàn)室是否發(fā)生其他變化?
1.與細(xì)胞培養(yǎng)有關(guān)的人員是否改變?
(1)培養(yǎng)細(xì)胞人員是否發(fā)生增減
(2)準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)人員是否發(fā)生增減
(3)實(shí)驗(yàn)人員的準(zhǔn)備過(guò)程是否規(guī)范
(4)實(shí)驗(yàn)人員是否接受過(guò)系統(tǒng)訓(xùn)練
(5)實(shí)驗(yàn)空間和布局是否過(guò)于擁擠
2.細(xì)胞培養(yǎng)所需材料是否改變?
(1)供應(yīng)商
(2)批號(hào)
(3)類型
(4)存儲(chǔ)期限
3.細(xì)胞培養(yǎng)的操作過(guò)程是否有變化?
(1)孵育時(shí)間
(2)操作速度
(3)操作順序
(4)位置
(5)范圍大小
4.細(xì)胞培養(yǎng)的專業(yè)儀器設(shè)備是否完好?
(1)新近購(gòu)置:是否新添儀器設(shè)備?
(2)運(yùn)行狀況:是否設(shè)備損壞?
(3)擺放位置:正在使用的儀器是否有足夠的擺放空間,是否要移動(dòng)鄰近的儀器?
(4)操作溫度:儀器是否在正常的溫度范圍內(nèi)運(yùn)轉(zhuǎn),你的樣品是否也需此溫度范圍?
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