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如果細胞發生微生物污染時,應如何處理?
原則上:直接滅菌后丟棄之。
當重要的培養污染時,研究者可能試圖消除或控制污染。首先,確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母,把污染細胞與其它細胞系隔離開,用實驗室消毒劑消毒培養器皿和超凈臺,檢查HEPA過濾器。
高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性,因而,做劑量反應實驗確定抗生素和抗霉菌素產生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如霉素b和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養污染的實驗步驟。
1.在無抗生素的培養基中消化、計數和稀釋細胞,稀釋到常規細胞傳代的濃度。
2.分散細胞懸液到多孔培養板中,或幾個小培養瓶中。在一個濃度梯度范圍內,把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如,霉素b推薦下列濃度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml。
3.每天觀測細胞毒性指標,如脫落,出現空泡,匯合度下降和變圓。
4.確定抗生素毒性水平后,使用低于毒性濃度2~3倍濃度的抗生素的培養液培養細胞2~3代。
5.在無抗生素的培養基中培養細胞一代。
6.重復步驟4。
7.在無抗生素的培養基中培養4~6代,確定污染是否以已被消除。
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