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蘇州千舍生物科技有限公司

如何避免細胞培養過程中的污染?

時間:2022-4-6閱讀:1541
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如何避免細胞培養過程中的污染?

主要還是考慮無菌環境,盡量做好操作臺的滅菌,別把培養基滴落在生物安全柜的入風口,別在培養箱里把培養基打翻。這兩個地方霉菌一旦滋生,那你就只能等著用甲醛熏蒸了。

紫外無法殺滅霉菌,酒精也不行,只能用甲醛熏蒸,但是一定要注意安全。復蘇的時候,水浴鍋也需要進行滅菌處理。一旦出現污染,不要急,能救的就用抗生素救一下,但是一般情況下,選擇扔掉。避免交叉感染,要不只能整個實驗室消毒了。

如果細胞發生微生物污染時,應如何處理?

原則上:直接滅菌后丟棄之。

當重要的培養污染時,研究者可能試圖消除或控制污染。首先,確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母,把污染細胞與其它細胞系隔離開,用實驗室消毒劑消毒培養器皿和超凈臺,檢查HEPA過濾器。

高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性,因而,做劑量反應實驗確定抗生素和抗霉菌素產生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如霉素b和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養污染的實驗步驟。

1.在無抗生素的培養基中消化、計數和稀釋細胞,稀釋到常規細胞傳代的濃度。

2.分散細胞懸液到多孔培養板中,或幾個小培養瓶中。在一個濃度梯度范圍內,把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如,霉素b推薦下列濃度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml。

3.每天觀測細胞毒性指標,如脫落,出現空泡,匯合度下降和變圓。

4.確定抗生素毒性水平后,使用低于毒性濃度2~3倍濃度的抗生素的培養液培養細胞2~3代。

5.在無抗生素的培養基中培養細胞一代。

6.重復步驟4。

7.在無抗生素的培養基中培養4~6代,確定污染是否以已被消除。

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