那么,透析胎牛血清具體適用于實驗中有哪些常見場景?我們來詳細講講。
一、實驗過程中需要標記氨基酸
使用放射性標記小分子,對生物合成過程進行監測,以研究蛋白質等大分子的生化性質、合成、加工、細胞內傳送、分泌和降解過程。這時,常將細胞放在含有充足養分和放射性標記氨基酸(如35S標記的蛋氨酸或半胱氨酸)的培養液中進行標記。
為避免外源未標記的氨基酸的干擾,這時所用的血清就是透析胎牛血清,不含蛋氨酸和半胱氨酸,基礎培養基也要求不含蛋氨酸和半胱氨酸。
這種方法常見于生化代謝調控與疾病的機理研究。其他常見標記物包括14C標記的絲氨酸、亮氨酸、纈氨酸或32P標記的焦磷酸,這時培養液中的基礎培養基和胎牛血清都要求不含有這種小分子。
二、穩定轉染的細胞株的篩選
另一種需要用到透析胎牛血清的情況是穩定轉染的細胞株的篩選。
最常見的基因工程用細胞株是二氫葉酸還原酶缺陷型(DHFR-)的CHO細胞。CHO(DHFR-)細胞由于不含DHFR,因而只能在含有胸苷、甘氨酸和次嘌呤的培養基中才能生長。若將DHFR基因導入這種缺陷型細胞,則細胞能在不含這三種分子的培養液中生長。同時,加入氨甲喋呤(MTX)可刺激DHFR基因大量表達,與之一同轉染的外源基因就能大量表達,因而可以獲得人們所需的基因工程藥物。類似的情況也見于雜交瘤細胞的篩選。
這時的胎牛血清由于不含有次嘌呤和胸腺嘧啶等,也常作為選擇培養基的一部分,參與陽性轉染細胞克隆的篩選。
基因調控的研究
采用報告基因檢測系統(常見熒光素酶作為報告基因)進行基因調控的研究時,為避免特定外源小分子(如激素等)作為基因激動劑的干擾,即需要透析胎牛血清來培養基因轉染后的細胞。
每個批次提供完整的檢測報告。
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