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簡單好用以及精確的細(xì)胞培養(yǎng)的原理和步驟
今天我們要講解的是,細(xì)胞培養(yǎng)的原理和步驟,簡單好用以及精確,學(xué)完之后,相信你對細(xì)胞培養(yǎng)將不再陌生。接下來就開始今天的學(xué)習(xí)吧!
細(xì)胞培養(yǎng):體外模擬體內(nèi)需要的生長條件(溫度,營養(yǎng)等),然后加上一些處理?xiàng)l件,比如做藥物篩選,就可以做抗性基因的表達(dá)的篩選,比如還可以測定某個(gè)基因敲低或是過表達(dá)的產(chǎn)物,這個(gè)當(dāng)然要結(jié)合WB來看最后基因的表達(dá)產(chǎn)物是否升高哦,細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用還有很多。
細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理:細(xì)胞傳代(生存空間和營養(yǎng)不足,長得太密,代謝廢物太多,要洗洗,同時(shí)也要分離出一部分細(xì)胞,要加入新的培養(yǎng)液),換液(生存空間和營養(yǎng)剩余,但是代謝廢物太多,要洗洗,要吃飯,才能長好,所以要洗和加入新鮮培養(yǎng)基),凍存(太多了,先存起來,液氮里面里就是低溫,保存能量,活得久),復(fù)蘇(解凍,恢復(fù)吃飯的能力,恢復(fù)生長。)這四步。
細(xì)胞培養(yǎng)的基本步驟(一定要明白每個(gè)步驟的意義和目的):
01細(xì)胞傳代(貼壁細(xì)胞):
試劑:PBS,胰酶,含血清的培養(yǎng)基;
流程:顯微鏡下看一看培養(yǎng)皿里的細(xì)胞多不多,太多(80%~90%)會(huì)導(dǎo)致代謝廢物很多,先吸掉廢液,再用PBS洗一洗,同時(shí)太多會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞黏在一起,這時(shí)候就需要加點(diǎn)胰酶消除它們之間的粘性,是否消除完,在顯微鏡下看一看,看完加入適宜的含血清的培養(yǎng)基,中和一下胰酶,這叫吹打,除此之外,細(xì)胞太多了,把一部分細(xì)胞移出來,加入適量的培養(yǎng)基放入孵箱繼續(xù)培養(yǎng),這叫傳代。
02細(xì)胞換液:
試劑:PBS,含血清的培養(yǎng)基;
流程:先吸掉代謝廢物(即細(xì)胞瓶中的培養(yǎng)液),再用PBS洗一洗,由于細(xì)胞長得不是很多,細(xì)胞之間沒有黏在一起,因此不需要加入胰酶來消除它們之間的粘性。由于細(xì)胞要吃飯,加入新鮮的含血清的培養(yǎng)基,最后放到孵箱里面進(jìn)行培養(yǎng)。
03細(xì)胞凍存:
試劑:凍存液,PBS,胰酶,含血清的培養(yǎng)基;
流程:要凍存,先配置凍存液,凍存液包含了:DMSO:防止在低溫(零度以下至-196℃)保存細(xì)胞時(shí),細(xì)胞內(nèi)液會(huì)形成冰晶,滲透壓會(huì)發(fā)生改變,細(xì)胞結(jié)構(gòu)會(huì)出現(xiàn)紊亂,會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)損傷。凍存液制備時(shí),一般需與血清一起配置:因?yàn)閮烧呋ト跁r(shí),會(huì)散發(fā)熱量,所以凍存液需提前制備。
因?yàn)榧?xì)胞太多了,需要凍存,所以要先看一看,吸一吸,洗一洗,分一分,中和一下,吹打制成細(xì)胞懸液,離心,吸掉上清液,加入凍存液,輕輕吹吸均勻,每管等量1ml裝入凍存管,4℃20min,-20℃30min,-80℃過夜,最后放入液氮罐。
04細(xì)胞復(fù)蘇:
試劑:含血清的培養(yǎng)基;
流程:從液氮中取出凍存管,迅速(小于3min)置于37℃水浴鍋中,解凍時(shí),邊晃動(dòng)邊觀察,當(dāng)看到只有一小塊冰存在時(shí),即可從水浴鍋中取出,打開凍存管,迅速將細(xì)胞懸液吸到離心管中,輕輕混勻,1000r/min,離心五分鐘,吸掉上清液,沉淀中加入適量培養(yǎng)液,放入孵箱中,培養(yǎng)。還有就是:復(fù)蘇的細(xì)胞,需要在24小時(shí)后,換一次培養(yǎng)液。
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