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如何挑選合適的elisa試劑盒?
1、查找待測樣本的蛋白濃度
可以通過NCBI的文獻,給出的蛋白表達量參考值來比較elisa試劑盒給出的樣本值與報道值是否一致。
2、試劑盒的應用種屬、檢測樣本的種類
除試劑盒特別說明外,一般不同種屬不能通用。常見待測樣本種類有:血清和血漿(不同抗凝劑),細胞上清,和細胞裂解液,試劑盒中不同樣本的稀釋液不混用。
3、•.檢測范圍:
•建立線性范圍:需測定9-11個濃度水平,每個濃度水平重復測定3-4次。
•驗證標稱線性參數:需測定4-6個濃度水平,每個濃度水平重復測定3-4次。
•所有樣本應在一次運行中或幾次間隔很短的運行中隨機測定,最好在一天之內完成。
4、試劑盒的其它指標
a. 靈敏度:
•示例:人IL-13的低可檢測濃度為0.1 pg/ml(6 次獨立實驗的平均值)。10 個零標準品濃度 OD 的平均值加上兩倍SD,計算低可檢測濃度。
•注意:靈敏度跟檢測范圍低點不相等。
b.•穩定性(重復性、精密性)
•酶標板內精密度3 個已知濃度的樣本酶標板內重復測定 20 次,評估酶標 板內的精密度。酶標板間精密度 3 個已知濃度的樣本酶標板間重復檢測 6 次,評估酶標板間的精密度。
•試劑盒一般板內變異系數小于10% ,板間變異系數小于15% (統計學概念)
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