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培養中常出現一些黑點,是污染嗎?
首先肉眼觀察培養液是否變渾濁,如果變渾濁,基本可以確定是污染;如果肉眼觀察培養液沒有變渾濁:在顯微鏡下觀察黑點大小和形狀是否規則,是否運動,是做布朗運動還是呈直線型快速移動。如果黑點大小不規則,做布朗運動,黑點可能是細胞碎片(可能是細胞狀態不佳或者消化過度引起的),也可能是血清反復凍融產生的蛋白沉淀引起的,也可能是細胞的代謝產物。如果黑點大小一致,快速移動,很可能是細菌污染。
如何預防細胞培養中黑點的產生?
掌握細胞傳代的最佳時機,不要細胞長老了再傳代;掌握好消化時間,防止消化過度產生細胞碎片;減少血清等試劑的凍融次數;將培養液的PH調到最佳;嚴格控制水質和器皿的清潔。
黑點已經產生了,如何進行處理?
如果判定黑點是污染,請及時將細胞處理后丟棄。其他情況,可參照以下進行:
如果是懸浮細胞:收集細胞上清慢速離心(500-600 rpm/min,5-6 min)并更換新的培養瓶;如果是貼壁細胞:將細胞用PBS洗2-3遍,洗的時候,輕輕拍打培養瓶,讓貼壁不牢的碎片和顆粒脫落,再棄去PBS,消化時先加低濃度的胰酶如0.05%胰酶消化1 min左右,讓細胞間隙中的顆粒和碎片脫落下來,去掉低濃度胰酶,然后正常消化細胞,將收集的細胞懸液慢速離心(500-600 rpm/min,5-6 min)并更換新的培養瓶,并可以嘗試適當增加血清濃度進行培養。
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