WINSERA胎牛血清為什么要熱滅活血清?有必要做熱滅活嗎?
加熱可以滅活血清中的補體系統,使補體去活化。通常未滅活的補體能夠刺激平滑肌收縮、肥大細胞和血小板組胺的釋放、激活淋巴細胞和巨噬細胞,同時還能夠參與溶解細胞的過程。
諸多研究表明大多數細胞的培養無須進行血清的熱滅活;而在免疫學研究和ES細胞、昆蟲細胞、平滑肌細胞的培養過程中,推薦使用熱滅活血清。實驗顯示,經正確熱滅活處理的血清,對細胞的生長只有微小的促進或*沒有促進作用,而通常因為高溫處理影響了血清的質量,造成細胞生長速率降低。并且熱處理過的血清,沉淀物明顯增多,倒置顯微鏡下觀察呈“小黑點",往往會使研究者誤以為是血清受到了污染,而把血清放于37℃中,沉淀物又會更增多,有會使研究者誤認為是微生物的分裂增殖。因此我們建議若非必須,可以不進行熱處理,既節省時間又確保質量。
熱滅活方法?
加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究,培養 ES 細胞、平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。若必須做血清的熱滅活,請遵守56 ℃,30 分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
1. 用上述描述的方法將血清在低溫冰箱或室溫下解凍。
2. 在血清解凍時,將一個容器裝入適量的水,用于模擬裝有血清瓶子在熱處理過程中檢測瓶內水的溫度。容器大小、質地和裝水的量最好與裝血清的瓶子相同或相似。
3. 待血清*解凍時,將含有血清的瓶子放在預熱的 56 ℃水浴里,不要將含有血清的瓶子讓水淹沒或接近瓶子的蓋子,以免導致污染。
4. 在開始加熱處理時,要及時使用溫度計測定模擬瓶內水的溫度。
5. 在預熱期間,每隔 3-5 分鐘要適當搖晃含有血清和水的瓶子,確保瓶內液體均勻加熱。6. 一旦模擬瓶內的水溫達到 55.8± 0.5 ℃時,開始計時,并在此溫度范圍內熱處理 30 分鐘,然后立即放在冰上冷卻。
為防止在熱處理過程中由蛋白質變性而導致的渾濁和沉淀現象,熱處理時應注意下列事項:
不要用高于 25 ℃ 以上的溫度加快解凍速度。
2. 在熱處理之前,要使血清*融解。
3. 不要使熱處理的溫度高于 56.3 ℃
4. 熱處理時間不要長于 30 分鐘。
5. 在加熱過程中一定要定時搖動血清。
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