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蘇州千舍生物科技有限公司

細胞污染防治方法

時間:2022-6-17閱讀:963
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細胞污染防治方法

1.細菌污染

細菌污染是細胞培養中最常見的污染,主要由操作不慎或使用了滅菌不*的耗材與試劑引入。最常見的有枯草桿菌、大腸桿菌、假單胞菌及白色葡萄球菌。鏡下形態則為長桿狀、短桿狀和顆粒狀等。

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左邊的就是比較典型的桿菌污染,一般桿菌會延軸向快速游動,量少時培養基澄清。右圖是顆粒狀污染,一般培養基會渾濁或有白色沙狀沉淀。

 

好氧菌增殖分裂迅速,感染24h內即可使培養基渾濁;厭氧菌在常規細胞培養條件下增殖緩慢,需要較長時間才會觀察到渾濁現象。

 

污染處理:由于國內細胞培養中抗生素使用泛濫,所以出現污染后加雙抗(青霉素&鏈霉素,Penicillin + Streptomycin)一般沒有效果。桿菌可選用100ug/ml慶大霉素處理一周,顆粒狀細菌可用25ug/ml環丙沙星處理一周,效果相對還不錯。

 

2. 真菌污染

細胞培養中最常見的污染真菌有:煙曲霉、黑曲菌、毛霉菌、白色念珠菌、酵母菌等。

左邊這張是比較典型的霉菌污染的圖片,右圖是酵母污染,鏡下可以看到明顯的出芽形態。

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污染處理:可用100ug霉素B/T25瓶,處理一周。

注:兩性霉素毒性較大,需要在細胞有50%以上且狀態沒受大影響前處理。

 

3.支原體污染

支原體的危害:支原體污染可以改變細胞的特性。例如部分支原體會快速消耗培養液中的精氨酸,與細胞競爭營養,從而使細胞的生長速度減慢或停止;同時支原體還可以改變細胞的酶譜、細胞膜成分,造成細胞染色體異常或細胞病理性改變等。上述情況會嚴重影響到使用這些細胞所做實驗的結果,導致結論不可靠。

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(PCR法檢測細胞上清中的支原體污染)

支原體的預防與清除:由于支原體無法在鏡下直接看到,需要通過PCR法等進行檢測才發現,出現污染后比較難發現。建議在養細胞每月檢測一次并結合每周抽檢,做到有污染早發現。對于正在進行支原體去除處理的細胞建議每周必檢,直至出現陰性結果并至少維持一月不同的細胞分開處理,優先處理“支原體陰性"細胞,后處理正在做去除處理的和受感染的細胞。同時,新引進的細胞系都進行支原體檢測,確保不給實驗室帶來新的污染。

 


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