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蘇州千舍生物科技有限公司

人乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞(MCF-7/Adr)

時間:2022-8-19閱讀:1091
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產(chǎn)品名稱:乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞(MCF-7/Adr)

細(xì)胞特性


1) 來源:乳腺

2) 形態(tài)上皮細(xì)胞樣,貼壁生長

3) 含量:>1x106  細(xì)胞數(shù)

4) 規(guī)格:T25或者1mL凍存管包裝

5)  用途:僅供科研使用。 

運(yùn)輸和保存:干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞11mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。(2T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

細(xì)胞接收后的處理:

1)收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。

2)請在45X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的*培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上,可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中,若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。

4備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶12傳代 。        

一.培養(yǎng)基培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

注意:培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)液是不含藥物的,細(xì)胞長到70-80%匯合度,去掉培養(yǎng)液,加含400ng/ml阿霉素藥物的培養(yǎng)液,放入培養(yǎng)箱,這段時間會有少部分細(xì)胞懸浮起來,屬于正常情況,通過換液可以去掉,等細(xì)胞長滿就可以消化傳代了,這時可以一直用藥物培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞,兩代之后就可以將藥物濃度提高到500ng/ml細(xì)胞凍存時不要在培養(yǎng)基中加藥物。

1)準(zhǔn)備1640 基礎(chǔ)培養(yǎng)基  ,優(yōu)質(zhì)胎牛血清 10%,P/S青霉素-鏈霉素 1%,500ng/mL ADR。

2)培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3)凍存液90%血清10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)。

 

二.細(xì)胞處理

1) 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇::

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL*培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子PBS潤洗細(xì)胞1-2

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA培養(yǎng)瓶中T251-2mLT752-3mL,置于37培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。 

3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按12的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3)細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例;

1. 細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計數(shù)板計數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細(xì)胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞(MCF-7/Adr)注意事項:

1. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意:凍存管浸沒在液氮中會泄漏,并會慢慢充滿液氮。解凍時,液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子,從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。

 人肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記A549+lucF12K+10%FBS+1%P/S
 人膽囊癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記GBC-SD+LUC1640+10%FBS+1%P/S 
人永生化表皮細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記HACAT+LUCDMEM+10%FBS+1%PS
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記HCC827+LUC1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%丙酮酸鈉+1%P/S 
人結(jié)腸癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記HCT116+LUCMcCOY's 5A +10%FBS+1%P/S 
人宮頸癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記HELA+LUC  MEM+10%FBS+1%P/S
人胃癌細(xì)胞黃色熒光標(biāo)記HGC-27+YFPDMEM+10%FBS+1%P/S 
人結(jié)直腸癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記LOVO+LUCF12K+10%FBS+1%P/S
人乳腺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記MCF-7+lucMEM+10%FBS+0.01mg/mL胰島素+1%P/S 
人乳腺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記MDA-MB-231+LUCL15+10%FBS+1%P/S
人高轉(zhuǎn)移性肝癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記MHCC-97H+lucDMEM+10%FBS+1%P/S
人胃癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記NCI-N87+LUC1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉+1%P/S 
人皮膚黑色素瘤細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記SK-MEL-2+LUCMEM+10%FBS+1%P/S  
人卵巢癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記SK-OV-3+LUCMccoy`s 5A +10%FBS+1%P/S 
人類星形膠質(zhì)瘤耐替莫唑胺細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記U251 MG/TMZ+LUC(3000)DMEM+10%FBS +1%P/S +TMZ
人乳腺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記ZR-75-1+luc1640含 NaHCO3 1.5g / L)+10%FBS+1%P/S 
小鼠乳腺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記4T1+luc1640+10%FBS+1%P/S 
小鼠黑色素瘤細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記B16-F10+LUCDMEM(含NaHCO3 1.5g/L)+10%FBS+1%P/S
小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記CT26+LUC1640+10%FBS+1%P/S  
小鼠膠質(zhì)細(xì)胞瘤熒光素酶標(biāo)記GL-261+lucDMEM+10%FBS+1% L-谷氨酰胺+1% HEPES+1%P/S 
小鼠肝癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記HEPA1-6+LUCDMEM(含NaHCO3 1.5g/L+10%FBS+1%丙酮酸納+1%P/S 
小鼠卵巢上皮癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記ID8+LUCDMEM+10%FBS+1%P/S  
小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記K7M2WT(K7M2-WT)-LUCDMEM+10%FBS+1%P/S 
小鼠肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記LLC+LUCDMEM+10%FBS+1%P/S 
小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記MC38+LUCDMEM+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%NEAA+1%丙酮酸鈉+1% HEPES+1%P/S 
小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記neuro-2a+lucMEM+10%FBS+1%P/S 
小鼠胰腺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記panc02+LUCDMEM+5%FBS+1%P/S
小鼠前列腺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記RM-1+LUCDMEM+10%FBS+1%P/S 
大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞綠色熒光標(biāo)記C6+LUCF12K +2.5%FBS+15%HS(馬血清)+1%P/S



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