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蘇州千舍生物科技有限公司

HEK293人胚腎細(xì)胞產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

時(shí)間:2022-8-22閱讀:1196
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產(chǎn)品名稱(chēng):HEK293人胚腎細(xì)胞

細(xì)胞特性

1)來(lái)源:腎

2)2)形態(tài): 上皮樣

3)含量:>1x106

4)污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5)規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝運(yùn)輸和保存:可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式:(1)干冰運(yùn)輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇;(2)存活細(xì)胞,收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng),傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

收到細(xì)胞后請(qǐng)拍照,3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,請(qǐng)及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。

細(xì)胞用途:僅供科研使用。細(xì)胞接收后的處理

1)收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2)請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀(guān)照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀(guān)察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的*培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上,可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中,若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。

4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 。                      

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備90%DMEM(H)+10%FBS+2mM L谷氨酰胺。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

二. 細(xì)胞處理:

1) 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇::

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL*培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。 

3. 輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3)細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例;

1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱(chēng)、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過(guò)夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項(xiàng):

1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意:凍存管浸沒(méi)在液氮中會(huì)泄漏,并會(huì)慢慢充滿(mǎn)液氮。解凍時(shí),液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子,從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。

HEK細(xì)胞是最早公布的Ad5-轉(zhuǎn)化的人類(lèi)細(xì)胞系。HEK293細(xì)胞是人腎上皮細(xì)胞系,有多種衍生株,比如HEK293、HEK293A、HEK293T/17等都是來(lái)源于人胚胎腎細(xì)胞,其極少表達(dá)細(xì)胞外配體所需的內(nèi)生受體,且比較容易轉(zhuǎn)染。HEK293 細(xì)胞系是原代人胚腎細(xì)胞轉(zhuǎn)染5型腺病毒(Ad5)DNA的永生化細(xì)胞,表達(dá)腺病毒5的基因。商業(yè)化的HEK 細(xì)胞均來(lái)源于1977年Graham 轉(zhuǎn)化的HEK細(xì)胞。目前, HEK293細(xì)胞系已經(jīng)成為一個(gè)常用的表達(dá)目的蛋白質(zhì)的細(xì)胞株。

HEK293細(xì)胞系及其衍生物廣泛用于病毒包裝的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和蛋白質(zhì)相互作用研究,以及快速小規(guī)模蛋白質(zhì)表達(dá)和生物制藥生產(chǎn)。最初的293細(xì)胞是1973年通過(guò)剪切5型腺病毒DNA轉(zhuǎn)化從一個(gè)流產(chǎn)的親子關(guān)系不明的人類(lèi)胚胎的腎臟中獲得的。人類(lèi)胚胎腎細(xì)胞起初似乎不容易轉(zhuǎn)化,經(jīng)過(guò)多次嘗試,僅在分離出一個(gè)轉(zhuǎn)化克隆幾個(gè)月后,細(xì)胞就開(kāi)始生長(zhǎng),該細(xì)胞系稱(chēng)為HEK293或293細(xì)胞(ATCC編號(hào)CRL-1573)。已知有一個(gè)4kbp的腺病毒基因組片段整合在19號(hào)染色體上編碼E1A/E1B蛋白,干擾細(xì)胞周期調(diào)控途徑,抑制細(xì)胞凋亡。細(xì)胞遺傳學(xué)分析證實(shí)HEK293系為亞三倍體。對(duì)HEK293系進(jìn)行了多重?zé)晒庠浑s交分析發(fā)現(xiàn)每個(gè)克隆中也可見(jiàn)多種核型,幾乎所有的細(xì)胞都存在相對(duì)于人類(lèi)參考基因組的染色體改變。

HEK293人胚腎細(xì)胞

人胚腎細(xì)胞 HEK-293(293) MEM+10%FBS+1%P/S 貼壁+懸浮生長(zhǎng)

人胚腎細(xì)胞 HEK-293A DMEM+10%FBS+1%P/S 貼壁+懸浮生長(zhǎng)

人高轉(zhuǎn)移鼻咽癌細(xì)胞系 5-8F  1640+10%FBS+1%P/S    貼壁生長(zhǎng)

人鼻咽癌細(xì)胞 C666-1 1640+10%FBS +1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人鼻咽癌細(xì)胞 NPC/HK-1 1640+10%FBS +1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

豬鼻甲黏膜成纖維細(xì)胞 PT-K75 DMEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)

人卵巢癌細(xì)胞 A2780 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%P/S   

人卵巢癌細(xì)胞+GFP A2780+GFP 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%P/S  

人卵巢腺癌細(xì)胞 CAOV-3 DMEM(含NaHCO3 1.5g / L)+10%FBS+1%P/S

人卵巢癌細(xì)胞 CoC1  1640+10%FBS+1%P/S  

人卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞 ES-2 McCOY's 5A +10%FBS+1%P/S

人卵巢癌細(xì)胞 HEY DMEM+10%FBS+1%P/S  

人卵巢癌細(xì)胞 HEY A8 DMEM+10%FBS+1%P/S

人高轉(zhuǎn)移卵巢癌細(xì)胞 HO-8910PM 1640+10%FBS+1%P/S

人正常卵巢上皮細(xì)胞系 IOSE-80(IOSE80;NFHIOSE-80;IOSE80UBC;IOSE-Van; IOSE-VAN) 1640+10%FBS+1%P/S

人卵巢顆粒細(xì)胞瘤細(xì)胞 KGN D/F12+10%FBS+1%P/S

人卵巢腺癌細(xì)胞 OVCAR-3 1640(含NaHCO3 1.5g/L)+20%FBS+1%P/S + 0.01mg/ml牛胰島素

人卵巢癌細(xì)胞 SK-OV-3 Mccoy`s 5A +10%FBS+1%P/S

人卵巢癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 SK-OV-3+LUC Mccoy`s 5A +10%FBS+1%P/S

小鼠卵巢上皮癌細(xì)胞 ID8 DMEM+10%FBS+1%P/S  

倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞 CHO DMEM+10%FBS+1%P/S

倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞,二氫葉酸還原酶缺陷 CHO/dhFr- IMDM+10%FBS+P/S1%+0.05mM次嘌呤+0.016mM胸腺嘧啶+100nM氨甲喋呤。

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞k1 亞克隆系 CHO-K1 F12K+10%FBS+1%P/S

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞k1 亞克隆系 CHO-K1(懸浮) CHO GROW CD2培養(yǎng)基+1%L-谷氨酰胺+1%P/S

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞 CTLA4 IG-24 DMEM+10%FBS+0.2mM脯氨酸+0.001mM氨甲蝶呤+1%P/S

倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞 LEC-1 MEMα+10%FBS+1%P/S

人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞 95-D  1640+10%FBS+1%P/S

 人肺癌細(xì)胞 A549  F12K+10%FBS+1%P/S   

 人肺癌細(xì)胞+RFP A549+RFP F12K+10%FBS+1%P/S

 人肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 A549+luc F12K+10%FBS+1%P/S

人肺癌細(xì)胞 Calu-1 MCCOY'S 5A+10%FBS+1%P/S  

人肺癌細(xì)胞 DMS 53 Waymouth's MB 752/1 medium (Invitrogen, 11220-035)+10%FBS+1%P/S

人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 HCC827 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%丙酮酸鈉+1%P/S

人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 HCC827+LUC 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%丙酮酸鈉+1%P/S

人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H1299 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%(10mM)HEPES +1%丙酮酸鈉+1%P/S

人肺癌細(xì)胞 NCI-H1437 1640+10%FBS+1%丙酮酸鈉+1%hepes+1%PS

人經(jīng)典小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-h1688 1640+20% FBS+1%P/S 細(xì)胞漲的慢2-3周發(fā)貨

人肺癌細(xì)胞 NCI-H1703 1640+10% FBS+1%P/S

人肺癌細(xì)胞 NCI-H1944 1640+10%FBS++1%PS

人肺癌細(xì)胞 NCI-H2126 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%丙酮酸鈉+1%P/S

人肺癌細(xì)胞 NCI-H2228 1640+10%FBS+1%P/S+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉

人肺癌細(xì)胞 NCI-H23 1640+10%FBS+1%P/S+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉

人肺癌細(xì)胞(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移) NCI-H292 1640+10%FBS+1%P/S

人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H358 1640+10%FBS+1%P/S

人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H446 1640+10%FBS+1%PS

人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H460 [H460]  1640+10%FBS+1%P/S+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉

人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H524  1640+10%FBS+1%P/S

人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H661[h661]  1640+10%FBS+1%P/S

人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H82 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉+1%P/S

人肺癌細(xì)胞 pc-9 1640+10%FBS+1%P/S

人小細(xì)胞肺癌 SBC-2  1640+10%FBS+1%P/S   

人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 SHP-77 1640+10FBS+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉+1% PS

小鼠肺癌細(xì)胞 LLC DMEM+10%FBS+1%P/S

小鼠肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 LLC+LUC DMEM+10%FBS+1%P/S

人腦髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞 D283 Med  MEM+10%FBS+1%P/S

人腦髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞 D341 Med MEM+1%丙酮酸鈉+1%NEAA+10%FBS+1%P/S  

永生化人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞 HCMEC/D3 內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)體系(PriMed-iCell-002)

人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞 HS683 DMEM+15%FBS+1%P/S  

人腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞 KNS-89 DMEM +10%FBS+1%P/S

人腦膠質(zhì)瘤 SNB-19 DMEM+10%FBS+1%P/S

人腦膠質(zhì)瘤 TJ905 DMEM+10%FBS+1%P/S

人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 U118MG(U-118MG) DMEM+10%FBS+1%P/S

人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 U87MG MEM+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%NEAA+1%P/S

人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤+RFP U87MG+RFP MEM+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%NEAA+1%P/S

小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)母細(xì)胞 G422 DMEM+10%FBS+1%P/S

小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞株 bEnd.3 DMEM(含NaHCO3 1.5g/L)+10%FBS+1%P/S  

小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞 neuro-2a MEM+10%FBS+1%P/S

小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 neuro-2a+luc MEM+10%FBS+1%P/S

大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞 C6 F12K +2.5%FBS+15%HS(馬血清)+1%P/S

大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞綠色熒光標(biāo)記 C6+LUC F12K +2.5%FBS+15%HS(馬血清)+1%P/S

大鼠腦星形膠質(zhì)細(xì)胞 CTX DMEM+10%FBS+1%P/S  

大鼠腦I型星形膠質(zhì)細(xì)胞 CTX-TNA2 DMEM+10%FBS+1%P/S

大鼠腦間質(zhì)細(xì)胞 DI TNC1 DMEM+10%FBS+1%P/S 


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