外泌體是指含有復雜RNA和蛋白質的小膜囊泡(30-150nm)。如今,它們特指直徑為40-100nm的盤狀囊泡。作為細胞間通訊的重要媒介,它作為信使,為細胞和細胞外環境傳遞信息,保證機體的正常工作。對于大多數細胞而言,用于體外培養的標準培養基必須在基礎培養基的基礎上添加胎牛血清(FBS)作為生長添加劑。然而,常用的FBS通常來自牛血清,其中含有大量的牛外泌體和外源性細胞外囊泡。這些外泌體含有牛相關蛋白或miRNA和其他分子。在研究相關細胞自身分泌的外泌體時,牛血清中的外泌體可能會造成嚴重的背景問題,從而影響或干擾結果的判斷。在細胞的標準化培養、細胞分泌的外泌體等相關研究中,血清中所含的外泌體會對研究結果產生巨大的干擾作用。
無外泌體血清*可以滿足外泌體研究中對細胞培養條件的要求。以優質胎牛血清為源血清,經特定方法處理后,血清中外泌體去除率達到97%以上。通過細胞生長實驗,含有外泌體freefbs的培養基支持大多數細胞的生長。與含有正常血清(FBS)的培養基相比,對細胞生長和存活有相同甚至更好的促進作用。
制備無外泌體血清常用的方法是超速離心。主要有三種方法:將血清與培養基按1:4比例稀釋,然后超速離心10000g過夜收集上清液;血清10000g直接離心過夜;以180000g離心3-6小時。隔夜離心時間視情況而定,一般在10-14小時之間。
需要注意的是,離心后,外泌體會在試管底部富集。吸上層血清時不要接觸底部沉淀物。上層血清約80%被吸收,剩余的混濁血清留作其他非外泌體細胞的培養。對于超速離心后的血清,可以檢測粒徑(離心前后的樣品)。如果純度不夠,則將離心后收集的血清進行第二次超速離心。
無外泌體血清使用注意事項:
1、產品冷凍后,高豐度蛋白會形成晶體,NTA檢測時會出現異峰,屬正常現象。
2、本產品已滅菌,可直接用于細胞培養。使用前請將產品置于2-8℃自然解凍,或分裝后于-20℃保存,但不要反復凍融。
3、請勿使用本產品進行高溫熱滅活。