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動物血清的定義:
血清,指血液凝固后,在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子后,分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。血清的主要作用是提供基本營養物質,包括激素、維生素、轉運蛋白、微量元素、擴散因子和生長因子等細胞增殖和維持的必需成分,促進細胞生長。
動物血清的分類:
1、按來源動物分
常見的血清供體動物,主要有牛、馬、豬、兔、雞等。
2、按照牛的年齡分
市場上常見的牛血清,根據采血時間不同和血清采制方法分為:又可以分為胎牛、新生牛、小牛血清和成年牛血清:胎牛血清(Foetal Bovine Serum,簡稱FBS):5-8月未出生胎牛,人工引產胎牛心臟穿刺取血;新生牛血清(Newborn Calf Serum,簡稱NBCS):出生14小時內未進食的新生牛,通常采用頸動脈采集血液分離得到的血清;小牛血清(Calf Serum):出生后1-12月齡小牛動脈采血分離血清;成年牛血清(Adult Bovine Serum,簡稱ABS):一歲以上成年牛,屠宰時收集全血后分離得到血清。
以上取血牛齡的差異主要是受當地國家畜牧業的發展及法規限制影響,因為牛血多為畜牧業副產業,并未有專門為取血而養的牛。不同牛齡血清所含的促細胞生長因子、促貼附因子、激素及其他活性物質等組分與比例不同。常規來說,年齡越小的牛血清,細胞培養效果越好。其中胎牛由于還未接觸外界,血液中所含抗體、補體等對細胞生長有害的成分最少,血清的質量高。根據血清質量從優到次排序依次為,胎牛>新生牛>小牛>成年牛。所以目前多數科研人員選擇胎牛血清進行細胞培養。
3、按照采集地點分
根據血源采集地不同,大致又可以分為澳洲、北美、南美及中國四大類。
從血源質量、加工工藝、質控上區分,從優到次排序依次是澳洲>北美>南美>國產。特別是生產過程中,澳洲和北美大多采用靜置分層工藝,對紅細胞破壞小,血清中的血紅蛋白和膽紅素較少,顏色呈透明的淡黃色;而南美則大多采用離心收集工藝,紅細胞破壞較多,血清中血紅蛋白和膽紅素較多,顏色偏紅。
根據不同品質分:
區分胎牛血清很重要的一點就是血清的內毒素含量,內毒素含量越低的血清,級別就越高,以胎牛血清為例:當血清中內毒素含量≤10EU/ml時,此血清為特級胎牛血清;當血清中內毒素含量﹥10EU/ml,≤ 25EU/ml時,此血清為優級胎牛血清;當血清中內毒素含量≥ 25EU/ml時,此血清為標準級胎牛血清;目前,由于同一廠家,不同批次的血清,內毒素數值也可能有較大差異,因此很多血清廠家在名稱上已不注明級別。但使用者仍可通過檢測報告進行甄別。
根據不同處理分:
透析胎牛血清:透析過濾去除10kD以下小分子(如次黃嘌呤和胸腺核苷),避免外源小分子對細胞產生干擾。適合脈沖示蹤實驗(例如同位素標記特定小分子加入到培養體系中,以研究細胞代謝),也適合轉染CHO后的篩選等應用。去外泌體血清:通過超速離心法去除絕大部分外泌體的血清,適用于外泌體相關細胞實驗研究。超低lgG的血清:使用親和層析等工藝,去除IgG,使其水平低于標準值,適用于抗體、病毒和病毒反應以及細胞表面抗原表位相關研究。活性炭/葡聚糖處理的血清:可降低血清中類固醇激素的濃度,例如雌二醇、孕酮、皮質醇、睪酮、T3 和 T4。適用于相關激素研究的實驗。
其他動物源血清:
馬血清:一般分為兩種:第一種馬血清含有的大分子蛋白比較多,適用于蛋白封閉;第二種馬血清為細胞培養級別。經過多次過濾,去除大多數大分子蛋白,但保留了血清中促細胞生長的活性因子,適用于細胞培養,例如神經細胞培養時,培養基中需要添加馬血清。豬血清:常用于豬肺炎支原體疫苗的生產。在對細胞和活疫苗進行支原體檢驗中,《獸藥典》明確推薦豬血清作為支原體檢驗用液體培養基的組成成分。兔血清:兔血清通常從六個月或更小的動物身上收集,可用于免疫細胞化學和免疫組織化學中的封閉血清。羊血清:多用做封閉液,也有一些研究人員發現,優質的羊血清可用于某些細胞的培養。雞血清:從屠宰供人類食用的健康雞中收集的。有研究用于血清維生素 B12 的放射性同位素稀釋測定。
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