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蘇州千舍生物科技有限公司

PANC-1 人胰腺癌細胞的培養方法

時間:2024-9-27閱讀:292
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PANC-1 人胰腺癌細胞(STR鑒定)

一、細胞描述

該人胰腺癌細胞PANC-1來源于一名56歲白人男性。1 U/ml 左旋天冬酰胺酶(L-asparaginase)可抑制其生長。此細胞可以在瓊脂糖上生長。

二、細胞特性

1)來源:人胰腺/導管

2)形態:上皮細胞樣,貼壁生長

3)含量:>1x10^6  細胞數

4)規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)用途:僅供科研使用。

三、運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞

(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系。

(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

四、細胞接收后的處理

1)收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯系我們。

2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態,同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態的依據。

3)貼壁細胞:細胞在37℃培養箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,可去除培養瓶中灌液培養基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養瓶中),加入新配制的wan全培養基6-8mL,放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上,可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

4)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的wan全培養基來培養細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1:2傳代 。

五、培養基及培養凍存條件準備:

 

1)DMEM 基礎培養基83%+特級胎牛血清(FBS500-WP-002)15%+GlutaMAX-1谷氨酰胺1 %+ P/S青霉素-鏈霉素1 %                                                                                                           

培養細胞時請注意

(1)傳代時細胞的接種密度應控制在 1萬-4萬 活細胞/平方厘米。

(2)選用高質量的胎牛血清配制培養液。

2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。

六、細胞處理:

1) 凍存細胞的復蘇:

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mLwan全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,wan全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8mlwan全培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:

1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的wan全培養基以保持細胞的生長活力,后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。

下面T25瓶為例;

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數板計數,來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,標注好名稱、代數、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。

A549/DDP

BEL7402/DDP

BIU-87/DDP

HCT8/DDP

MCF7/DDP

SGC7901/DDP

L1210/DDP

K562/DDP

Huh-7/DDP

SMMC-7721/DDP

HO-8910/DDP

HCT15/DDP

A2780/DDP

BEL7402/FU

HCT8/FU

SGC7901/FU

hct116/FU

SW620/5-Fu

BGC823/FU

Hela/FU

HCT15/FU

HCT8/L

hct116/L

SMMC-7721/L

HGC27/L

HCT8/Taxol

K562/Taxol

A549/Taxol?

BEL7402/Taxol

BGC823/Taxol

Hela/Taxol

HCT15/Taxol

A549/Adr

BEL7402/Adr

BIU-87/Adr

HCT8/Adr

MCF7/Adr

SGC7901/Adr

hct116/Adr

K562/Adr

SMMC-7721/Adr

Hela/adr

BGC823/adr

HO-8910/Adr

HCT8V

A549/吉非替尼耐藥株

PC-9/GR

HUH-7/Sorafenib


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