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蘇州千舍生物科技有限公司

胎牛血清SFBS

參  考  價:面議
具體成交價以合同協議為準

產品型號

品牌Bovogen

廠商性質經銷商

所在地蘇州市

更新時間:2023-12-21 18:06:43瀏覽次數:1631次

聯系我時,請告知來自 化工儀器網
供貨周期 現貨 應用領域 醫療衛生,生物產業
胎牛血清SFBS,SFBS,Bovogen Biologicals Pty Ltd 由Rick Clements于2001年成立,總部位于澳大利亞墨爾本。

貨號:SFBS

規格:500ml

千舍生物開工大吉,干細胞專用,特級胎牛血清*......

胎牛血清SFBS

產品名稱:新西蘭胎牛血清

貨號:SFBS

規格:500ml

品牌:BOVOGEN

細胞培養最基本的是做好污染防控,包括微生物污染的防控和細胞系間交叉污染的防控。

實驗中需保持良好的操作習慣,所用材料的位置擺放要順手,污染源和已滅菌物品要分開放置。實驗室也需定期清潔與消毒。

血清與培養基

通常血清的添加比例為10%,當然也可根據細胞狀態和生長速率適當增加或減少添加比例。在更換血清品牌或者批次時,最好需對血清的品質進行驗證,防止對實驗造成影響。

對于培養基,目前商品化的比較成熟,穩定性也較好。如若需自配培養基時,過濾前攪拌時間不宜過長(培養基中營養豐富,細菌常溫下20min就可繁殖一代,其代謝產物會對培養基的品質產生影響)。培養基過濾除菌后,應對培養基進行無菌驗證,防止污染。

細胞培養瓶

目前商品化的細胞培養瓶主要為瓶蓋是否帶氣孔兩種。其中不帶透氣孔細胞培養瓶擰緊后需適當回旋瓶蓋,保證CO2能順利進入細胞培養瓶。

細胞培養過程中,對于適應能力強的腫瘤細胞,可在傳代3-4次后更換新的細胞培養瓶。對于非腫瘤細胞系如293THEK293等細胞,建議每次傳代更換新的細胞培養瓶來保證細胞狀態。

細胞傳代

正常細胞形態較好,輪廓清晰,邊緣透亮,細胞增殖狀況良好。當貼壁細胞長到密度90%時,需進行傳代。

傳代時通常使用胰酶消化法。該方法又分為干消化法和濕消化法。

干消化法:胰酶浸潤后棄去胰酶,待細胞變圓后加入新鮮培養基吹下后再進行細胞傳代。

濕消化法:待細胞變圓,肉眼觀察下成流沙狀脫落時即可加入新鮮培養基終止消化,1000rpm離心5min,棄去上清,用新鮮培養基重懸傳代。

吹打細胞時,手法要輕柔,避免吹打出氣泡,造成細胞因內外壓差破裂,同時需避免刮到瓶壁影響細胞的貼壁。

不同細胞的貼壁能力不同,消化時間不同;不同細胞細胞間連接強度不一樣,消化時間不同;同一細胞生長狀狀況不同,消化時間不同。消化時適時觀察細胞形態,避免因過度消化影響細胞活性。

傳代間隔時間和傳代比例因細胞而異。細胞傳代過程中,當細胞出現狀態不好或者污染時及時棄去細胞,重新復蘇。

細胞凍存與復蘇

當細胞生長狀況較好或者代數較早時,需及時大量的凍存。

細胞凍存液比例為培養基:血清:DMSO=7:2:1,也可血清:DMSO=9:1。細胞凍存密度通常為1-3×106/ml。細胞凍存采用慢凍方式,減少冰晶形成,避免細胞損傷。通常4℃放置0.5 h-20℃放置2 h-80℃冰箱中過夜,取出凍存管,移入液氮容器內。

細胞復蘇時升溫要快,防止在解凍過程中水分進入細胞,形成冰晶,影響細胞存活。38℃水浴不時搖動,在1分鐘內使其*融化,1000rpm離心5min,棄去上清,用新鮮培養基重懸移入培養瓶中。

用真誠感動細胞

俗話說,心誠則靈。對待細胞培養也應如此,“自己要用的細胞自己養",多去觀察細胞生長狀態。

所謂“知彼知己,百戰不殆"。培養細胞需要我們的耐心以及不斷的摸索和積累,了解了每種細胞各自的習性后,再“傲嬌"的細胞也能在我們的“真誠"下認真“成長"※※※※

因此選擇正確的,靠譜的胎牛血清及廠家極其重要↓↓↓

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貼壁細胞傳代:

1)移棄使用過的細胞培養液。(不要直接倒掉,避免瓶口殘留導致易污染)

2)使用不含鈣鎂離子的平衡鹽溶液(PBS)沖洗細胞。從與貼壁細胞層相對的容器一側輕輕加入沖洗液,以避免攪動細胞層,前后搖晃容器數次,最后移棄沖洗液。(洗去殘留的血清,避免影響胰酶的活性。)

3)以 25 cm2的培養瓶為例,向瓶內加入1ml胰蛋白酶-EDTA(請根據各細胞的指引使用合適的濃度)消化液,輕輕搖動培養瓶,使消化液流遍所有細胞表面,放到37 ℃ 孵育。通常,幾分鐘內,會發現胞質回縮、細胞間隙增大,傾斜培養瓶時細胞層能自然流下,此時應加入2-3ml含血清的*培養液終止消化(細胞解離所需時間請參考各細胞的指引,并建議每隔30秒在顯微鏡下觀察細胞的解離情況)。另外,并不是所有貼壁細胞都適用采用胰蛋白酶進行解離,請根據各細胞的指引選擇合適的解離方法。

4)使培養瓶傾斜,吸取培養瓶內液體輕輕沖向原細胞生長表面,重復該動作2-3次,使所有細胞沿瓶底流下,再輕柔地把細胞吹打成單個懸液(吹打過程中應避免氣泡的產生)。

PS:對于難消化的細胞,盡量不要通過用力吹打的方式來處理,以免對細胞產生物理損傷。可以先將已經消化的細胞分出來,及時終止消化。然后再對仍然貼壁的細胞進行再次消化。做到分層消化,避免易消化細胞長時間在胰酶消化下受損。

5)把所有的細胞懸液轉移到15ml離心管中,800-1000rpm離心3-5分鐘后移棄上清。

6)加入新的含血清*培養液重懸成單細胞懸液。按各細胞指引推薦的傳代比例,把細胞懸液均勻分到各培養器皿中,補足新的含血清*培養液,輕輕搖晃混勻。

7)放到37 ℃ 孵育,第二天顯微鏡下觀察細胞的貼壁情況。

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9、如何區分活細胞和死細胞?

顯微鏡下觀察:活細胞中間透亮,飽滿,有光澤,死細胞較暗。也可以通過臺盼藍染色來計算細胞活力。

10、如何用臺盼蘭計數活細胞?

用無血清培養基把細胞懸液稀釋到2002000 /毫升,在0.1 毫升的細胞懸液中加入0.1 毫升的0.4%的臺盼蘭溶液。輕輕混勻,用血球計數板計數細胞。活細胞排斥臺盼蘭,因而染成藍色的細胞是死細胞,注意計數需在加入臺盼藍10min內完成。有細胞計數儀的,可直接用計數儀進行。

11、二價離子抑制胰蛋白酶活性嗎?

二價離子的確抑制胰蛋白酶活性。

12、使用胰蛋白酶加入EDTA是為什么?

EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子,以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細胞前,用EDTA清洗細胞,以消除來自培養基中所有的二價離子。

13、可否使用與原先不同的培養基?

不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應的細胞培養基,若驟然使用和原先提供之培養條件不同之培養基,細胞大都無法立即適應,易造成細胞狀態不好,最終造成細胞無法存活。

14、可否使用與原先不同的血清種類?

不能。血清是細胞培養上一個極為重要的營養來源,所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。

15、細胞為何生長不均勻?

細胞傳代后放入培養箱沒有搖勻,或者放入時搖勻,但在細胞貼壁前,又移動了培養瓶,頻繁開關培養箱引起的振動或者培養瓶中培養液過少,培養箱擱板表面不平整,這些因素會導致細胞生長不均勻。

16、購買的細胞死亡或細胞存活率不佳

研究人員在細胞培養時出現存活率不佳,常見原因可歸納為:培養基使用錯誤或培養基品質不佳。血清使用錯誤或血清的品質不佳。運輸過程對細胞有嚴重影響。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后,加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養溫度使用錯誤。細胞置于–80°C太久。

人卵巢癌細胞熒光素酶標記 SK-OV-3+LUC

人肝癌細胞 smmc-7721

人腦膠質瘤 SNB-19

人肝癌細胞 snu-1

人肝癌細胞 Snu-182

人膀胱上皮永生化細胞 sv-huc-1

人滑膜肉瘤細胞 SW982 [SW-982]

人結腸腺癌細胞 SW1116

人腎上腺皮質小細胞癌細胞 SW-13

人腎上腺皮質小細胞癌細胞 SW1353

人胰腺癌細胞 SW1990

人結腸腺癌細胞 SW480

人甲狀腺癌細胞 SW579

人結直腸腺癌細胞 SW620

人結直腸腺癌細胞+GFP SW620+GFP

人結直腸癌細胞氟尿嘧啶耐藥株 SW620/5FU

人膀胱移行細胞癌 SW780

人膀胱移行細胞癌細胞 T24

人乳腺導管癌細胞 T47D

人膠質母細胞瘤 T98G

人食管癌細胞 TE-1

人食管癌細胞 TE-12

人單核細胞白血病細胞 thp-1

人腦膠質瘤 TJ905

人乳頭狀甲狀腺癌細胞株 TPC-1

人甲狀腺癌細胞 TT

人喉癌細胞 TU212

人喉癌細胞 TU-138

人腦星形膠質母細胞瘤 U118MGU-118MG

人成骨肉瘤細胞 U-2 OS

人類星形膠質細胞瘤細胞 U251 MG (KO)

人類星形膠質瘤耐替莫唑胺細胞 U251 MG/TMZ

人類星形膠質瘤耐替莫唑胺細胞熒光素酶標記 U251 MG/TMZ+LUC(3000)

人骨髓瘤細胞 U266

人腦星形膠質母細胞瘤 U87MG

人腦星形膠質母細胞瘤+RFP U87MG+RFP

人淋巴瘤細胞 U-937

人膀胱移行細胞癌 UM-UC-3

人前列腺癌細胞 VCAP

人視網膜神經膠質瘤細胞 WERI-RB-1

人黑素瘤細胞 WM-115

人正常前列腺基質永生化細胞 WPMY-1

人正常肝細胞 WRL68

云南宣威人肺腺癌細胞系+GFP XWLC-05+GFP

人膽囊癌細胞系 ZJU-0430

人膽囊癌細胞系熒光素酶標記 ZJU-0430+LUC

人乳腺癌細胞 ZR-75-1

17、細胞抱團怎么處理?

一些懸浮細胞抱團生長是正常現象,大部分懸浮細胞在細胞密度很高的情況下,很可能會出現部分細胞抱團生長的現象,聚團細胞很容易死亡并演化成絮狀物,殃及周圍的懸浮細胞,因此在培養懸浮細胞時需控制好細胞密度。如果出現了細胞團,可以通過細胞篩去掉部分較大的細胞團,也可以嘗試一下方法:將細胞懸液收集到15 ml離心管中,靜置20 min左右,小心取上層細胞上清培養(該方法只能去除部分較大的細胞團)

18、細胞內有空泡,是否是正常現象?

部分細胞本身存在一定的空泡(HepG2Ishikawa及一些耐藥株等),這個是正常現象。如果只有少數細胞有內出現極少空泡,則很可能是細胞狀態不佳,可以通過調整血清濃度,控制消化,控制傳代比例及時間等方法來調整細胞狀態;如果大部分細胞出現空泡,且單個細胞內空泡數目偏多,則可能細胞代次較高,細胞老化所致,需更換代次較早的細胞。

19、細胞傳兩代后開始逐漸死亡的原因

很可能是培養體系不適合細胞(未使用推薦的培養體系);或者消化過度,對細胞有嚴重影響;或者是傳代比例不合適(具有密度依賴性的細胞,傳代太稀;或者生長較快的細胞,傳代較密,細胞嚴重堆疊生長)

20、細胞生長逐漸變慢是什么原因?

細胞增殖變慢有以下原因:1. 消化過度 2. 傳代過密 3.細胞營養不良 4.細胞頻繁傳代 5.細胞狀態不佳或老化 6.細胞存在污染。

21、培養細胞時應使用5%10%CO2?

一般培養基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統,而培養基中NaHCO3的含量將決定細胞培養時應使用的CO2濃度。當培養基中NaHCO3含量為每公升3.7 g時,細胞培養時應使用10% CO2;當培養基中NaHCO3為每公升1.5 g時,則應使用5% CO2培養細胞。

22CO2培養箱之水盤如何保持清潔?

定期(每周一次)更換水盤里面的水,水盤的水必須使用無菌蒸餾水或無菌去離子,水盤中可添加1%硫酸銅以預防霉菌污染。

23、細胞接種密度多少合適?

依照細胞株基本數據上的接種密度或稀釋分盤的比例接種即可。細胞數太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長的一個重要原因。按照我們的經驗:一般倍增時間24 h內的細胞,傳代比率1:6-1:12為宜,倍增時間24-48 h的細胞,傳代比率1:3-1:8為宜,倍增時間超過48h的細胞, 傳代比率1:2-1:4為宜。

24、培養中常出現一些黑點,是污染嗎?

首先肉眼觀察培養液是否變渾濁,如果變渾濁,基本可以確定是污染;如果肉眼觀察培養液沒有變渾濁:在顯微鏡下觀察黑點大小和形狀是否規則,是否運動,是做布朗運動還是呈直線型快速移動。如果黑點大小不規則,做布朗運動,黑點可能是細胞碎片(可能是細胞狀態不佳或者消化過度引起的),也可能是血清反復凍融產生的蛋白沉淀引起的,也可能是細胞的代謝產物。如果黑點大小一致,快速移動,很可能是細菌污染。

25、如何預防細胞培養中黑點的產生?

掌握細胞傳代的最佳時機,不要細胞長老了再傳代;掌握好消化時間,防止消化過度產生細胞碎片;減少血清等試劑的凍融次數;將培養液的PH調到最佳;嚴格控制水質和器皿的清潔。

26、黑點已經產生了,如何進行處理?

如果判定黑點是污染,請及時將細胞處理后丟棄。其他情況,可參照以下進行:

如果是懸浮細胞:收集細胞上清慢速離心(500-600 rpm/min5-6 min)并更換新的培養瓶;如果是貼壁細胞:將細胞用PBS2-3遍,洗的時候,輕輕拍打培養瓶,讓貼壁不牢的碎片和顆粒脫落,再棄去PBS,消化時先加低濃度的胰酶如0.05%胰酶消化1 min左右,讓細胞間隙中的顆粒和碎片脫落下來,去掉低濃度胰酶,然后正常消化細胞,將收集的細胞懸液慢速離心(500-600 rpm/min5-6 min)并更換新的培養瓶,并可以嘗試適當增加血清濃度進行培養。

27、培養用dish,flask是否相同?

不同廠牌的dishflask,其所coatingpolymer不同,制造程序亦不同,雖對大部分細胞沒有太大之影響,惟少數細胞則可能因使用廠牌不同之dishflask而有顯著之生長差異。

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WINSERA®胎牛血清

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FBS500-WS-002

500ML

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FBS500-WP-002

500ML

現貨

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FBS500-WE-002

500ML

現貨

無外泌體血清

FBS050-EXO

500ML

現貨




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