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澳洲胎牛血清

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澳洲胎牛血清

產(chǎn)品名稱:干細胞專用

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規(guī)格:500ml

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澳洲胎牛血清


產(chǎn)品名稱:干細胞專用


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規(guī)格:500ml


品牌:winsera \....

§細胞抱團怎么處理?

一些懸浮細胞抱團生長是正常現(xiàn)象,大部分懸浮細胞在細胞密度很高的情況下,很可能會出現(xiàn)部分細胞抱團生長的現(xiàn)象,聚團細胞很容易死亡并演化成絮狀物,殃及周圍的懸浮細胞,因此在培養(yǎng)懸浮細胞時需控制好細胞密度。如果出現(xiàn)了細胞團,可以通過細胞篩去掉部分較大的細胞團,也可以嘗試一下方法:將細胞懸液收集到15 ml離心管中,靜置20 min左右,小心取上層細胞上清培養(yǎng)(該方法只能去除部分較大的細胞團)。

§細胞內(nèi)有空泡,是否是正常現(xiàn)象?

部分細胞本身存在一定的空泡(如HepG2,Ishikawa及一些耐藥株等),這個是正常現(xiàn)象。如果只有少數(shù)細胞有內(nèi)出現(xiàn)極少空泡,則很可能是細胞狀態(tài)不佳,可以通過調(diào)整血清濃度,控制消化,控制傳代比例及時間等方法來調(diào)整細胞狀態(tài);如果大部分細胞出現(xiàn)空泡,且單個細胞內(nèi)空泡數(shù)目偏多,則可能細胞代次較高,細胞老化所致,需更換代次較早的細胞。

§細胞傳兩代后開始逐漸死亡的原因

很可能是培養(yǎng)體系不適合細胞(未使用推薦的培養(yǎng)體系);或者消化過度,對細胞有嚴重影響;或者是傳代比例不合適(具有密度依賴性的細胞,傳代太稀;或者生長較快的細胞,傳代較密,細胞嚴重堆疊生長)。

§細胞生長逐漸變慢是什么原因?

細胞增殖變慢有以下原因:1. 消化過度 2. 傳代過密 3.細胞營養(yǎng)不良 4.細胞頻繁傳代 5.細胞狀態(tài)不佳或老化 6.細胞存在污染。

§培養(yǎng)細胞時應使用5%或10%CO2?

一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng),而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細胞培養(yǎng)時應使用的CO2濃度。當培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7 g時,細胞培養(yǎng)時應使用10% CO2;當培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5 g時,則應使用5% CO2培養(yǎng)細胞。

§CO2培養(yǎng)箱之水盤如何保持清潔?

定期(每周一次)更換水盤里面的水,水盤的水必須使用無菌蒸餾水或無菌去離子,水盤中可添加1%硫酸銅以預防霉菌污染。

§細胞接種密度多少合適?

依照細胞株基本數(shù)據(jù)上的接種密度或稀釋分盤的比例接種即可。細胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長的一個重要原因。按照我們的經(jīng)驗:一般倍增時間24 h內(nèi)的細胞,傳代比率1:6-1:12為宜,倍增時間24-48 h的細胞,傳代比率1:3-1:8為宜,倍增時間超過48h的細胞, 傳代比率1:2-1:4為宜。因此選擇正確的,靠譜的胎牛血清及廠家極其重要↓↓↓↓

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DECO0109 人抗利尿激素(ADH)ELISA試劑盒

DECO0110 人抗凝血素抗體IgG(aPT2)ELISA試劑盒

DECO0111 人腫瘤壞死因子配體相關分子-1A(TL1A)ELISA試劑盒

DECO0112 人氫化的松(HYD)ELISA試劑盒

DECO0113 人微量蛋白(mALB)ELISA試劑盒

DECO0114 人葉酸(FA)ELISA試劑盒

DECO0115 人胃蛋白酶原A(PGA)ELISA試劑盒

DECO0117 人胰島素樣生長因子-Ⅰ受體(IGF-ⅠR)ELISA試劑盒

DECO0118 人胰島素樣生長因子結合蛋白-3(IGFBP-3)ELISA試劑盒

DECO0119 人髓過氧化物酶(MPO)ELISA試劑盒

DECO0120 人核糖體蛋白L22(RPL22)ELISA試劑盒

DECO0121 人胰島素樣生長因子-2(IGF-2)ELISA試劑盒

DECO0122 人雄烯二酮(ASD)ELISA試劑盒

DECO0123 人白細胞介素32(IL-32)ELISA試劑盒

DECO0124 人胰島素(Insulin)ELISA試劑盒

DECO0125 人膽固醇酯轉運蛋白(CETP)ELISA試劑盒

DECO0126 人胎盤蛋白13 (PP13)ELISA試劑盒

DECO0127 人胎盤蛋白14 (PP14)ELISA試劑盒

DECO0128 人胃蛋白酶原C(PGC)ELISA試劑盒

DECO0129 人胃動素(MTL)ELISA試劑盒

DECO0130 人胃泌素(Gas)ELISA試劑盒

DECO0131 人集聚蛋白(Agrin)ELISA試劑盒

DECO0132 人腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒

DECO0133 人可溶性P選擇素(sP-selectin)ELISA試劑盒

DECO0134 人可溶性髓系細胞觸發(fā)受體-1(sTREM-1)ELISA試劑盒

DECO0135 人同型半胱氨酸(Hcy)ELISA試劑盒

DECO0136 人可溶性E選擇素(sE-selectin)ELISA試劑盒

DECO0137 人總膽汁(TBA)ELISA試劑盒

DECO0138 人異檸檬酸脫氫酶(ICD)ELISA試劑盒

DECO0139 人抑癌基因Beclin1(BECN1)ELISA試劑盒

DECO0140 人抑癌基因SEMA3B ELISA試劑盒

DECO0141 人去甲腎上腺素(NA) ELISA試劑盒

DECO0142 人前列腺素E2(PGE2)ELISA試劑盒

DECO0143 人前列腺素E1(PGE1)ELISA試劑盒

DECO0144 人心房利鈉肽(h-ANP)ELISA試劑盒

DECO0145 人乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)ELISA試劑盒

DECO0146 人可溶性血管細胞粘附因子1(sVCAM-1)ELISA試劑盒

DECO0147 人可溶性粘附分子sCD26 ELISA試劑盒

DECO0148 人布魯氏桿菌igG ELISA試劑盒

DECO0149 人單胺氧化酶A(MAOA) ELISA試劑盒

DECO0150 人抗丙型肝炎抗體(抗-HCV)ELISA試劑盒

DECO0151 人總膽固醇(TC)ELISA試劑盒

DECO0152 人富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61)ELISA試劑盒

DECO0153 人麻疹病毒IgM(MV IgM)ELISA試劑盒

DECO0154 人基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)ELISA試劑盒

DECO0155 人可溶性轉鐵蛋白受體1(sTfR1)ELISA試劑盒

DECO0156 人基質(zhì)裂解素2(ST-2)ELISA試劑盒

DECO0157 人纖維介素蛋白(fgl2)ELISA試劑盒

DECO0158 人埃滋蛋白(Ezrin)ELISA試劑盒

DECO0159 人組織型纖維溶酶激活物(t-PA)ELISA試劑盒

DECO0160 人纖維連接蛋白(FN)ELISA試劑盒

DECO0161 人單純皰疹病毒(HSV)ELISA試劑盒

DECO0162 人胰島素自身抗體(IAA)ELISA試劑盒

DECO0163 人內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(visfatin)ELISA試劑盒

DECO0164 25羥基維D( 25-OH-D) ELISA試劑盒

DECO0165 人可替丁(Cotinine )ELISA試劑盒

DECO0166 人凋亡相關因子(FAS/CD95)ELISA試劑盒20.如果細胞發(fā)生微生物污染時,應如何處理?

原則上:直接滅菌后丟棄之。

當重要的培養(yǎng)污染時,研究者可能試圖消除或控制污染。首先,確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母,把污染細胞與其它細胞系隔離開,用實驗室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺,檢查HEPA過濾器。
高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性,因而,做劑量反應實驗確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如霉素b和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實驗步驟。

1.在無抗生素的培養(yǎng)基中消化、計數(shù)和稀釋細胞,稀釋到常規(guī)細胞傳代的濃度。

2.分散細胞懸液到多孔培養(yǎng)板中,或幾個小培養(yǎng)瓶中。在一個濃度梯度范圍內(nèi),把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如,霉素b推薦下列濃度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml。

3.每天觀測細胞毒性指標,如脫落,出現(xiàn)空泡,匯合度下降和變圓。

4.確定抗生素毒性水平后,使用低于毒性濃度2~3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞2~3代。

5.在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞一代。

6.重復步驟4。

7.在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4~6代,確定污染是否以已被消除。

21.支原體(mycoplasma) 污染的細胞,是否能以肉眼觀察出異狀?

不能。除極有經(jīng)驗之專家外,大多數(shù)遭受支原體污染的細胞株,無法以其外觀分辨之。

22.支原體污染會對細胞培養(yǎng)有何影響?

支原體污染幾乎可影響所有細胞之生長參數(shù), 代謝及研究之任一數(shù)據(jù)。故進行實驗前,必須確認細胞為mycoplasma-free,實驗結果之數(shù)據(jù)方有意義。

23. 偵測出細胞株有支原體污染時, 該如何處理?

直接滅菌后丟棄,以避免污染其它細胞株。

24. CO2 培養(yǎng)箱之水盤如何保持清潔?

定期(至少每兩周一次) 以無菌蒸餾水或無菌去離子水更換之。

25.為何培養(yǎng)基保存于4 °C 冰箱中, 顏色會偏暗紅色, 且pH值會越來越偏堿性?

培養(yǎng)基保存于4 °C 冰箱中, 培養(yǎng)基內(nèi)之CO2 會逐漸溢出,造成培養(yǎng)基越來越偏堿性。而培養(yǎng)基中之酸堿指示劑(通常為phenol red) 的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基偏堿之結果,將造成細胞生長停滯或死亡。若培養(yǎng)基偏堿時,可以通入無菌過濾之CO2, 以調(diào)整pH 值。

26. 各種細胞培養(yǎng)用的dish,flask是否均相同?

不同廠牌的dish 或flask, 其所coating 的polymer 不同, 制造程序亦不同, 雖對大部分細胞沒有太大之影響,惟少數(shù)細胞則可能因使用廠牌不同之dish 或flask 而有顯著之生長差異。

27. 購買之細胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會發(fā)生細胞數(shù)目太少之情形?

研究人員在冷凍細胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細胞數(shù)目太少, 大都是因為離心過程操作上的失誤,造成細胞的物理性損傷, 以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心, 應待細胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可。

28.購買之細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因?

研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳, 常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后,加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細胞置于–80 °C 太久。

29. 收到之冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?

冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當,造成冷凍管裂損,建議使用鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時,均應立刻將冷凍管再一次扭緊。

30.L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)中重要嗎?它在溶液中不穩(wěn)定嗎?

L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)時是重要的。脫掉氨基后,L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細胞的能量來源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時間后會降解,但是確切的降解率一直沒有最終定論。L-谷氨酰胺的降解導致氨的形成,而氨對于一些細胞具有毒性。

31.GlutaMAX-I是什么?培養(yǎng)細胞如何利用GlutaMAX-I?這個二肽有多穩(wěn)定?

GlutaMAX-I 二肽是一個L-谷氨酰胺的衍生物,其不穩(wěn)定的alpha-氨基用L-丙氨酸來保護。一種肽酶逐漸裂解二肽,釋放L-谷氨酰胺供利用。
GlutaMAX-I二肽非常穩(wěn)定,即使在121磅滅菌20分鐘,GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解,如果在相同條件下,L-谷氨酰胺幾乎*降解。

32.什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅?

酚紅在培養(yǎng)基中用作PH值的指示劑:中性時為紅色,酸性時為黃色,堿性時為紫色。研究表明,酚紅可以模擬固醇類激素的作用,(特別是雌激素)。為避免固醇類反應,培養(yǎng)細胞,尤其是哺乳類細胞時,用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測,一些研究人員在做流式細胞檢測時,不使用加有酚紅的培養(yǎng)基。

33.如何用臺盼蘭計數(shù)活細胞?

用無血清培養(yǎng)基把細胞懸液稀釋到200~2000個/毫升,在0.1毫升細胞懸液中加0.1毫升0.4%的臺盼蘭溶液。輕輕混勻,數(shù)分鐘后,用血球計數(shù)板計數(shù)細胞。活細胞排斥臺盼蘭,因而染成藍色細胞是死細胞。

34.培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么?

丙酮酸鈉可以作為細胞培養(yǎng)中的替代碳源,盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,但是,如果沒有葡萄糖的話,細胞也可以代謝丙酮酸鈉。

35.二價離子抑制蛋白酶活性嗎?使用蛋白酶時加入EDTA的目的是什么?

二價離子的確抑制蛋白酶活性。EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子,以便保持抑制蛋白酶的活性。建議蛋白酶處理細胞前,用EDTA清洗細胞,以消除來自培養(yǎng)基中所有的二價離子。

36.室溫下配制的Tris-HCl溶液,在37℃使用時PH值是多少?

緩沖液PH值隨溫度變化而變化。下表列出了50mM Tris-HC 溶液在4℃,25℃,37℃時,不同PH值。

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