貓p27核心抗原(P27)ELISA試劑盒
規(guī)格:96T/48T
英文:Cat p27 core antigen (P27) ELISA Kit
Elisa試劑盒原理
Elisa的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。進(jìn)行檢測時,樣品中的受檢物質(zhì)(抗原或抗體)與固定的抗體或抗原結(jié)合。通過洗板除去非結(jié)合物,再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,此時,能固定下來的酶量與樣品中被檢物質(zhì)的量相關(guān)。通過加入與酶反應(yīng)的底物后顯色,根據(jù)顏色的深淺可以判斷樣品中物質(zhì)的含量,進(jìn)行定性或定量的分析。
ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。這種測定方法中有3種必要的試劑:(1) 固相的抗原或抗體;(2) 酶標(biāo)記的抗原或抗體;(3) 酶作用的底物。根據(jù)試劑的來源和標(biāo)本的性狀及檢測的具備條件,有以下幾種常用檢測方法
雙抗體夾心法測抗原
雙抗體夾心法是將特異性抗體結(jié)合到固相載體上形成固相抗體,然后和待測血清中的響應(yīng)抗原結(jié)合形成免疫復(fù)合物,洗滌后加酶標(biāo)記抗體,與免疫復(fù)合物中的抗原結(jié)合形成酶標(biāo)抗體-抗原-固相抗體復(fù)合物,加底物顯色,判斷抗原的含量。
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猴白介素2(IL-2)ELISA試劑盒
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猴透明質(zhì)酸(HA) ELISA試劑盒
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猴B病毒(BV)ELISA試劑盒
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猴載脂蛋白A1(apo-A1) ELISA試劑盒
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猴γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒
猴胰島素(INS) ELISA試劑盒
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macaque herpesvirus 1 (Bvirus)獼猴皰疹病毒1型(B病毒)ELISA試劑盒
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猴中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白(NGAL)ELISA試劑盒
猴纖溶酶原(Plg) ELISA試劑盒
猴子黃體生成素 LHELISA試劑盒
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猴狂犬病(RV)ELISA試劑盒
猴逆轉(zhuǎn)錄病毒(Retrovirus)SRV ELISA試劑盒
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猴狂犬病毒抗體(RV-Ab)ELISA試劑盒
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猴免疫球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒
貓p27核心抗原(P27)ELISA試劑盒
競爭法
首先將特異性抗體包被于固相載體表面,經(jīng)洗滌后分成兩組:一組加酶標(biāo)記抗原和被測抗原的混合液,另一組只加酶標(biāo)記抗原,經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色,這兩組底物降解量之差,即為所要測定的未知抗原的量。此方法測定的抗原只要有一個結(jié)合部位即可,對小分子抗原如激素和藥物類的測定常用此法。
直接法
在直接Elisa中,抗原通過被動吸附直接固定在板的表面,并使用HRP標(biāo)記的一抗進(jìn)行檢測。將無色底物引入樣品,該底物與酶結(jié)合物反應(yīng),并產(chǎn)生可測量的副產(chǎn)物。根據(jù)底物的選擇,該副產(chǎn)物可以是比色的,化學(xué)發(fā)光的或熒光的。信號產(chǎn)生的大小與樣品中抗原的數(shù)量成正比。
間接Elisa本質(zhì)上是直接ELISA的修改版本。在間接ELISA中,用于檢測抗原的一抗是未偶聯(lián)的。取而代之的是,對一抗的宿主物種具有反應(yīng)性的酶標(biāo)二級抗體被用于檢測一抗-抗原復(fù)合物(間接檢測抗原)。將無色底物引入樣品,該底物與酶結(jié)合物反應(yīng),并產(chǎn)生可測量的副產(chǎn)物。根據(jù)底物的選擇,該副產(chǎn)物可以是比色的,化學(xué)發(fā)光的或熒光的。信號產(chǎn)生的大小與樣品中抗原的數(shù)量成正比。與直接ELISA相比,使用輔助檢測試劑具有明顯的優(yōu)勢,即信號放大。
Elisa試劑盒的組成
(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);
(2)酶標(biāo)記的抗原或抗體(結(jié)合物);
(3)酶的底物;
(4)對照品(定性測定中),參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測定中);
(5)結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液;
(6)洗滌液,在板式ELISA中,常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水;
(7)酶反應(yīng)終止液。
Elisa試劑盒分類
細(xì)胞因子檢測試劑盒
心肌梗塞檢測試劑盒
內(nèi)分泌檢測試劑盒
肝纖維化檢測試劑盒
自身免疫檢測試劑盒
腫瘤標(biāo)志物檢測試劑盒
優(yōu)育檢測試劑盒
傳染病檢測試劑盒
特種蛋白檢測試劑盒
樣本處理
1血清:將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時或4℃過夜,然后1000×g離心20分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果),稱重后將剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。
4細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:請1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。