貓甲狀腺素(T4)ELISA試劑盒
規格:96T/48T
英文:Cat thyroxine (T4) ELISA Kit
Elisa試劑盒原理
Elisa的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。進行檢測時,樣品中的受檢物質(抗原或抗體)與固定的抗體或抗原結合。通過洗板除去非結合物,再加入酶標記的抗原或抗體,此時,能固定下來的酶量與樣品中被檢物質的量相關。通過加入與酶反應的底物后顯色,根據顏色的深淺可以判斷樣品中物質的含量,進行定性或定量的分析。
ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。這種測定方法中有3種必要的試劑:(1) 固相的抗原或抗體;(2) 酶標記的抗原或抗體;(3) 酶作用的底物。根據試劑的來源和標本的性狀及檢測的具備條件,有以下幾種常用檢測方法
雙抗體夾心法測抗原
雙抗體夾心法是將特異性抗體結合到固相載體上形成固相抗體,然后和待測血清中的響應抗原結合形成免疫復合物,洗滌后加酶標記抗體,與免疫復合物中的抗原結合形成酶標抗體-抗原-固相抗體復合物,加底物顯色,判斷抗原的含量。
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競爭法
首先將特異性抗體包被于固相載體表面,經洗滌后分成兩組:一組加酶標記抗原和被測抗原的混合液,另一組只加酶標記抗原,經孵育洗滌后加底物顯色,這兩組底物降解量之差,即為所要測定的未知抗原的量。此方法測定的抗原只要有一個結合部位即可,對小分子抗原如激素和藥物類的測定常用此法。
直接法
在直接Elisa中,抗原通過被動吸附直接固定在板的表面,并使用HRP標記的一抗進行檢測。將無色底物引入樣品,該底物與酶結合物反應,并產生可測量的副產物。根據底物的選擇,該副產物可以是比色的,化學發光的或熒光的。信號產生的大小與樣品中抗原的數量成正比。
間接Elisa本質上是直接ELISA的修改版本。在間接ELISA中,用于檢測抗原的一抗是未偶聯的。取而代之的是,對一抗的宿主物種具有反應性的酶標二級抗體被用于檢測一抗-抗原復合物(間接檢測抗原)。將無色底物引入樣品,該底物與酶結合物反應,并產生可測量的副產物。根據底物的選擇,該副產物可以是比色的,化學發光的或熒光的。信號產生的大小與樣品中抗原的數量成正比。與直接ELISA相比,使用輔助檢測試劑具有明顯的優勢,即信號放大。
Elisa試劑盒的組成
(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);
(2)酶標記的抗原或抗體(結合物);
(3)酶的底物;
(4)對照品(定性測定中),參考標準品和控制血清(定量測定中);
(5)結合物及標本的稀釋液;
(6)洗滌液,在板式ELISA中,常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水;
(7)酶反應終止液。
Elisa試劑盒分類
細胞因子檢測試劑盒
心肌梗塞檢測試劑盒
內分泌檢測試劑盒
肝纖維化檢測試劑盒
自身免疫檢測試劑盒
腫瘤標志物檢測試劑盒
優育檢測試劑盒
傳染病檢測試劑盒
特種蛋白檢測試劑盒
樣本處理
1血清:將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜,然后1000×g離心20分鐘,取上清即可,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
2血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
3組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。
4細胞培養物上清或其它生物標本:請1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將上清置于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。