HFL1人胚肺成纖維細胞
F12K+10% FBS
貼壁
成纖維細胞樣
細胞培養基本知識
一般拿到細胞后,應該注意什么?
收到細胞先不開蓋,用酒精將整個細胞瓶外壁進行消毒,放在培養箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收細胞時的培養基拍一張照片,觀察培養基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各兩張),排除細胞本身污染的情況。
02何時須更換培養基?
視細胞生長密度而定,常規細胞2-3天更換培養基。
03細胞何時進行傳代較好?
一般情況下細胞生長至*匯合后就應該傳代,所有細胞生長都有一個要求不宜生長過密(也就是常說的長老了),但有接觸抑制的細胞,在匯合前就必須進行傳代,這類細胞一般在密度70-80%就進行傳代,否則會引起細胞分化。
04貼壁細胞如何進行傳代?
去掉原T25培養瓶里面的培養基,T25瓶加3-4 ml PBS洗1-2次;棄PBS,再加1.5 ml的Trypsin-EDTA (1X)消化液消化細胞,顯微鏡下觀察,待細胞變圓,細胞間隙明顯,部分細胞剛開始脫離瓶壁,加4 ml左右*培養液混勻終止消化,將細胞小心吹打下來,1000 rpm/min室溫離心5min;棄上清,細胞沉淀用*培養液重懸,按要求分瓶(視細胞密度而定1:2-1:3,1:3-1:6,1:6-1:8),每T25瓶補足培養基至5-6 ml,37℃、5%CO2孵箱培養。
05懸浮性細胞應如何傳代處理?
一般僅需持續加入新鮮培養基于原培養角瓶中,稀釋細胞濃度即可,若培養液太多時,將細胞懸液移入離心管中,1000 rpm/min 室溫離心5 min。棄上清,細胞沉淀用*培養液重懸,按要求分瓶(視細胞密度而定1:4-1:8),每T25瓶加*培養液至4-5 ml,37℃、5%CO2孵箱培養。有些懸浮細胞趨于成團生長,此時細胞生長狀態良好,當補液時,需避免反復吹打。
06貼壁細胞傳代如何使用胰酶?
一般使用trypsin-EDTA濃度為0.25% trypsin-0.53 mM EDTA.2Na或0.05%trypsin-0.02 mM EDTA.2Na。消化液濃度過高時,易造成培養基中細胞碎片增多,黑渣子增多,常規細胞傳代時建議用0.05%的胰酶進行消化,對于難消化的細胞可采用0.25%胰酶進行消化,細胞密度過高超過80%時,采用分步消化法。胰酶儲存在–20°C,解凍在4°C進行,第一次開瓶后應立即少量分裝于無菌試管中,保存于–20°C,避免反復冷凍解凍造成trypsin之活性降低,并可減少污染之機會。
07如何控制胰酶消化時間?
胰酶消化的程度是細胞培養中的一個關鍵步驟:消化過度細胞碎片增多,黑渣子增多,細胞會成片脫落,嚴重影響細胞活性,并有部分細胞漂浮,隨棄去的胰酶流失;消化不足則細胞難于從瓶壁上吹下,反復吹打同樣也會損傷細胞活性。
不同細胞對消化液的敏感性不同,胰酶消化的時間也會有差異。胰酶消化時間與胰酶的濃度,是否含EDTA,胰酶的儲存時間,胰酶的儲存溫度,是否反復凍融,消化加入的胰酶體積,消化溫度及細胞的密度有關。消化對于新購買的細胞,建議客戶先用低濃度的胰酶仔細去摸索一下消化時間,可每隔1分鐘鏡下觀察細胞是否變圓,記錄最佳消化時間,下一次操作參考之前的記錄來控制時間即可。
人多發性骨髓瘤細胞 MM.1R
人多發性骨髓瘤細胞 MM.1S
人急性淋巴母細胞白血病細胞 MOLT-4
人胚肺成纖維細胞 MRC-5(有限細胞系)
人急性淋巴母細胞白血病細胞 MT-4
人侵襲性脈絡膜黑色素瘤細胞 MUM2B
人前B急性淋巴細胞白血病細胞 NALM-6
人畸胎癌細胞 NCCIT
人非小細胞肺癌細胞 NCI-H1299
人肺腺癌細胞 NCI-H1395
人肺癌細胞 NCI-H1437
人非小細胞肺腺癌細胞 NCI-H157
人肺支氣管癌細胞 NCI-H1650[H1650](MKN-1)
人肺癌細胞 NCI-H1703
人肺癌細胞 NCI-H1944
人肺腺癌細胞 NCI-H1975
人肺癌細胞 NCI-H2126
人肺鱗癌細胞 NCI-H226
人肺癌細胞 NCI-H23
人肺癌細胞(淋巴結轉移) NCI-H292
人腎上腺皮質細腺癌細胞 NCI-H295R
人非小細胞肺癌細胞 NCI-H358
人小細胞肺癌細胞 NCI-H446
人大細胞肺癌細胞 NCI-H460 [H460]
人大細胞肺癌細胞 NCI-H661[h661]
人胃癌細胞 NCI-N87
人胃癌細胞熒光素酶標記 NCI-N87+LUC
人膽囊癌細胞 NOZ
人腎癌細胞 OS-RC-2
人卵巢腺癌細胞 OVCAR-3
人結直腸癌細胞 P53R [JHU-56]
人胰腺癌細胞 Panc 03.27
人胰腺癌上皮細胞 Panc 05.04
人胰腺癌細胞 PANC-1
人胰腺癌細胞吉西他濱耐藥株 PANC-1/GEM
人胰腺癌細胞 PANC10.05
人胰腺癌細胞 PATU8988t(PATU8988)
人胰腺癌細胞 PATU8988S
人前列腺癌 PC-3
人肺癌細胞 pc-9
人胰腺導管腺癌細胞 PL45
人肝癌細胞 PLC/PRF/5
人胚腎細胞 ProPakA.6
人正常肝細胞 QSG-7701
人淋巴瘤細胞 Raji
人B淋巴瘤細胞 RAMOS RA1
人肝膽管癌細胞 RBE
人橫紋肌肉瘤細胞 RD
人急性非B非T淋巴細胞白血病細胞 REH
人子宮內膜癌細胞 RL95-2
人多發性骨髓瘤細胞 RPMI8226
人結腸腺癌細胞 RKO
人膀胱移行細胞乳頭瘤 RT4
人前列腺正常細胞 RWPE-1
人前列腺正常細胞 RWPE-2
人小細胞肺癌 SBC-2
人膀胱鱗癌細胞 SCaBER
人神經母細胞瘤細胞 sh-sy5y
人神經母細胞瘤細胞 sh-sy5y轉染突變型
人神經母細胞瘤細胞 sh-sy5y轉染野生型
人子宮頸鱗癌細胞 SIHa
人乳腺癌細胞 SK-BR-3
人乳腺癌細胞 SK-BR-3+IUC
人肝腹水腺癌細胞 SK-HEP-1
人低分化肺腺癌細胞 SK-LU-1
人皮膚黑色素瘤細胞 SK-MEL-2
人皮膚黑色素瘤細胞熒光素酶標記 SK-MEL-2+LUC
人肺鱗癌細胞 SK-MES-1
人神經上皮瘤細胞 SK-N-MC
人腎母細胞瘤細胞 SK-NEP-1
人神經母細胞瘤細胞 SK-N-SH
人卵巢癌細胞 SK-OV-3
人卵巢癌細胞熒光素酶標記 SK-OV-3+LUC
人肝癌細胞 smmc-7721
人腦膠質瘤 SNB-19
人肝癌細胞 snu-1
人肝癌細胞 Snu-182
人膀胱上皮永生化細胞 sv-huc-1
人滑膜肉瘤細胞 SW982 [SW-982]
人結腸腺癌細胞 SW1116
人腎上腺皮質小細胞癌細胞 SW-13
人腎上腺皮質小細胞癌細胞 SW1353
人胰腺癌細胞 SW1990
人結腸腺癌細胞 SW480
人甲狀腺癌細胞 SW579
人結直腸腺癌細胞 SW620
人結直腸腺癌細胞+GFP SW620+GFP
142140210 SW620/5FU
人膀胱移行細胞癌 SW780
人膀胱移行細胞癌細胞 T24
人乳腺導管癌細胞 T47D
人膠質母細胞瘤 T98G
人食管癌細胞 TE-1
人食管癌細胞 TE-12
人單核細胞白血病細胞 thp-1
人腦膠質瘤 TJ905
人乳頭狀甲狀腺癌細胞株 TPC-1
人甲狀腺癌細胞 TT
人喉癌細胞 TU212
人喉癌細胞 TU-138
人腦星形膠質母細胞瘤 U118MG(U-118MG)
人成骨肉瘤細胞 U-2 OS
人類星形膠質細胞瘤細胞 U251 MG (KO)
人類星形膠質瘤耐替莫唑胺細胞 U251 MG/TMZ
人類星形膠質瘤耐替莫唑胺細胞熒光素酶標記 U251 MG/TMZ+LUC(3000)
人骨髓瘤細胞 U266
人腦星形膠質母細胞瘤 U87MG
人腦星形膠質母細胞瘤+RFP U87MG+RFP
人淋巴瘤細胞 U-937
人膀胱移行細胞癌 UM-UC-3
人前列腺癌細胞 VCAP
人視網膜神經膠質瘤細胞 WERI-RB-1
人黑素瘤細胞 WM-115
人正常前列腺基質永生化細胞 WPMY-1
人正常肝細胞 WRL68
云南宣威人肺腺癌細胞系+GFP XWLC-05+GFP
人膽囊癌細胞系 ZJU-0430
人膽囊癌細胞系熒光素酶標記 ZJU-0430+LUC
人乳腺癌細胞 ZR-75-1
HFL1人胚肺成纖維細胞
巨噬細胞屬免疫細胞,有多種功能,是研究細胞吞噬、細胞免疫和分子免疫學的 重要對象。巨噬細胞容易獲得,便于培養,并可進行純化。巨噬細胞屬不繁殖細 胞群,在條件適宜下可生活 2-3 周,多用做原代培養,難以長期生存。
巨噬細胞也建有無限細胞系,大多來自小鼠,如 P331、S774A.1、RAW309Cr.l 等,均獲惡性,培養中呈巨噬細胞形態和吞噬功能,易于傳代和瓶壁分離,但難 以建株。
培養巨噬細胞可用各樣方法和各種來源來獲取細胞, 以小鼠腹腔取材法最為實用, 其法如下:1、實驗前三天,向小鼠腹腔內注入無菌硫羥乙酸肉湯 lml(勿注入腸內!,以 ) 刺流產生大量的巨噬細胞。
2、引頸處死小鼠。
3、手提鼠尾將其全浸入 70%乙醇中 3-5 秒。
4、置動物于解剖臺,用針頭固定四肢,持鑷撕開腹部皮膚,但勿傷及腹膜壁, 把皮膚拉向上下兩側,暴露出腹膜壁。
5、用 70%酒精擦洗腹膜壁,注射器吸 10ml Eagle 液注入腹腔中,同時用手指從 兩側壓揉腹膜壁,使液體在腹腔內流動。
6、 用針頭輕挑起腹壁并微傾向一側. 使腹腔中液體集中于針頭下吸取入針管內。
7、小心拔出針頭,把液體注入離心管。
8、4℃下 250g 離心 10 分鐘后,去上清,加 10ml Eagle 培養基。
9、計數細胞。每只鼠可產生 20 一 30×106 細胞,其中 90%為巨噬細胞。
10、以 3×105 個貼附細胞/平方厘米接種。
11、接種數小時后,除去培養液,可去除其它白細胞,純化培養細胞,用 Eagle 液沖洗 1 一 2 次,再加新 Eagle 培養液置 CO2 溫箱中。
豬腎細胞系 LLC-PK-1 DMEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長
豬腎細胞系 PK-13 DMEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長
豬鼻甲黏膜成纖維細胞 PT-K75 DMEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長
豬髖動脈內皮細胞 PIEC 1640+10%FBS+1%P/S 貼壁生長