ARPE-19人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞
DMEM/F12(1:1)+10% FBS
貼壁
上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞培養(yǎng)基本知識(shí)
一般拿到細(xì)胞后,應(yīng)該注意什么?
收到細(xì)胞先不開(kāi)蓋,用酒精將整個(gè)細(xì)胞瓶外壁進(jìn)行消毒,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細(xì)胞100X,200X各兩張),排除細(xì)胞本身污染的情況。
02何時(shí)須更換培養(yǎng)基?
視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定,常規(guī)細(xì)胞2-3天更換培養(yǎng)基。
03細(xì)胞何時(shí)進(jìn)行傳代較好?
一般情況下細(xì)胞生長(zhǎng)至*匯合后就應(yīng)該傳代,所有細(xì)胞生長(zhǎng)都有一個(gè)要求不宜生長(zhǎng)過(guò)密(也就是常說(shuō)的長(zhǎng)老了),但有接觸抑制的細(xì)胞,在匯合前就必須進(jìn)行傳代,這類(lèi)細(xì)胞一般在密度70-80%就進(jìn)行傳代,否則會(huì)引起細(xì)胞分化。
04貼壁細(xì)胞如何進(jìn)行傳代?
去掉原T25培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)基,T25瓶加3-4 ml PBS洗1-2次;棄PBS,再加1.5 ml的Trypsin-EDTA (1X)消化液消化細(xì)胞,顯微鏡下觀察,待細(xì)胞變圓,細(xì)胞間隙明顯,部分細(xì)胞剛開(kāi)始脫離瓶壁,加4 ml左右*培養(yǎng)液混勻終止消化,將細(xì)胞小心吹打下來(lái),1000 rpm/min室溫離心5min;棄上清,細(xì)胞沉淀用*培養(yǎng)液重懸,按要求分瓶(視細(xì)胞密度而定1:2-1:3,1:3-1:6,1:6-1:8),每T25瓶補(bǔ)足培養(yǎng)基至5-6 ml,37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。
05懸浮性細(xì)胞應(yīng)如何傳代處理?
一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中,稀釋細(xì)胞濃度即可,若培養(yǎng)液太多時(shí),將細(xì)胞懸液移入離心管中,1000 rpm/min 室溫離心5 min。棄上清,細(xì)胞沉淀用*培養(yǎng)液重懸,按要求分瓶(視細(xì)胞密度而定1:4-1:8),每T25瓶加*培養(yǎng)液至4-5 ml,37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。有些懸浮細(xì)胞趨于成團(tuán)生長(zhǎng),此時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好,當(dāng)補(bǔ)液時(shí),需避免反復(fù)吹打。
06貼壁細(xì)胞傳代如何使用胰酶?
一般使用trypsin-EDTA濃度為0.25% trypsin-0.53 mM EDTA.2Na或0.05%trypsin-0.02 mM EDTA.2Na。消化液濃度過(guò)高時(shí),易造成培養(yǎng)基中細(xì)胞碎片增多,黑渣子增多,常規(guī)細(xì)胞傳代時(shí)建議用0.05%的胰酶進(jìn)行消化,對(duì)于難消化的細(xì)胞可采用0.25%胰酶進(jìn)行消化,細(xì)胞密度過(guò)高超過(guò)80%時(shí),采用分步消化法。胰酶儲(chǔ)存在–20°C,解凍在4°C進(jìn)行,第一次開(kāi)瓶后應(yīng)立即少量分裝于無(wú)菌試管中,保存于–20°C,避免反復(fù)冷凍解凍造成trypsin之活性降低,并可減少污染之機(jī)會(huì)。
07如何控制胰酶消化時(shí)間?
胰酶消化的程度是細(xì)胞培養(yǎng)中的一個(gè)關(guān)鍵步驟:消化過(guò)度細(xì)胞碎片增多,黑渣子增多,細(xì)胞會(huì)成片脫落,嚴(yán)重影響細(xì)胞活性,并有部分細(xì)胞漂浮,隨棄去的胰酶流失;消化不足則細(xì)胞難于從瓶壁上吹下,反復(fù)吹打同樣也會(huì)損傷細(xì)胞活性。
不同細(xì)胞對(duì)消化液的敏感性不同,胰酶消化的時(shí)間也會(huì)有差異。胰酶消化時(shí)間與胰酶的濃度,是否含EDTA,胰酶的儲(chǔ)存時(shí)間,胰酶的儲(chǔ)存溫度,是否反復(fù)凍融,消化加入的胰酶體積,消化溫度及細(xì)胞的密度有關(guān)。消化對(duì)于新購(gòu)買(mǎi)的細(xì)胞,建議客戶(hù)先用低濃度的胰酶仔細(xì)去摸索一下消化時(shí)間,可每隔1分鐘鏡下觀察細(xì)胞是否變圓,記錄最佳消化時(shí)間,下一次操作參考之前的記錄來(lái)控制時(shí)間即可。
人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞 MM.1R
人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞 MM.1S
人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞 MOLT-4
人胚肺成纖維細(xì)胞 MRC-5(有限細(xì)胞系)
人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞 MT-4
人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞 MUM2B
人前B急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞 NALM-6
人畸胎癌細(xì)胞 NCCIT
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H1299
人肺腺癌細(xì)胞 NCI-H1395
人肺癌細(xì)胞 NCI-H1437
人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞 NCI-H157
人肺支氣管癌細(xì)胞 NCI-H1650[H1650](MKN-1)
人肺癌細(xì)胞 NCI-H1703
人肺癌細(xì)胞 NCI-H1944
人肺腺癌細(xì)胞 NCI-H1975
人肺癌細(xì)胞 NCI-H2126
人肺鱗癌細(xì)胞 NCI-H226
人肺癌細(xì)胞 NCI-H23
人肺癌細(xì)胞(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移) NCI-H292
人腎上腺皮質(zhì)細(xì)腺癌細(xì)胞 NCI-H295R
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H358
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H446
人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H460 [H460]
人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H661[h661]
人胃癌細(xì)胞 NCI-N87
人胃癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 NCI-N87+LUC
人膽囊癌細(xì)胞 NOZ
人腎癌細(xì)胞 OS-RC-2
人卵巢腺癌細(xì)胞 OVCAR-3
人結(jié)直腸癌細(xì)胞 P53R [JHU-56]
人胰腺癌細(xì)胞 Panc 03.27
人胰腺癌上皮細(xì)胞 Panc 05.04
人胰腺癌細(xì)胞 PANC-1
人胰腺癌細(xì)胞吉西他濱耐藥株 PANC-1/GEM
人胰腺癌細(xì)胞 PANC10.05
人胰腺癌細(xì)胞 PATU8988t(PATU8988)
人胰腺癌細(xì)胞 PATU8988S
人前列腺癌 PC-3
人肺癌細(xì)胞 pc-9
人胰腺導(dǎo)管腺癌細(xì)胞 PL45
人肝癌細(xì)胞 PLC/PRF/5
人胚腎細(xì)胞 ProPakA.6
人正常肝細(xì)胞 QSG-7701
人淋巴瘤細(xì)胞 Raji
人B淋巴瘤細(xì)胞 RAMOS RA1
人肝膽管癌細(xì)胞 RBE
人橫紋肌肉瘤細(xì)胞 RD
人急性非B非T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞 REH
人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞 RL95-2
人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞 RPMI8226
人結(jié)腸腺癌細(xì)胞 RKO
人膀胱移行細(xì)胞乳頭瘤 RT4
人前列腺正常細(xì)胞 RWPE-1
人前列腺正常細(xì)胞 RWPE-2
人小細(xì)胞肺癌 SBC-2
人膀胱鱗癌細(xì)胞 SCaBER
人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 sh-sy5y
人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 sh-sy5y轉(zhuǎn)染突變型
人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 sh-sy5y轉(zhuǎn)染野生型
人子宮頸鱗癌細(xì)胞 SIHa
人乳腺癌細(xì)胞 SK-BR-3
人乳腺癌細(xì)胞 SK-BR-3+IUC
人肝腹水腺癌細(xì)胞 SK-HEP-1
人低分化肺腺癌細(xì)胞 SK-LU-1
人皮膚黑色素瘤細(xì)胞 SK-MEL-2
人皮膚黑色素瘤細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 SK-MEL-2+LUC
人肺鱗癌細(xì)胞 SK-MES-1
人神經(jīng)上皮瘤細(xì)胞 SK-N-MC
人腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞 SK-NEP-1
人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 SK-N-SH
人卵巢癌細(xì)胞 SK-OV-3
人卵巢癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 SK-OV-3+LUC
人肝癌細(xì)胞 smmc-7721
人腦膠質(zhì)瘤 SNB-19
人肝癌細(xì)胞 snu-1
人肝癌細(xì)胞 Snu-182
人膀胱上皮永生化細(xì)胞 sv-huc-1
人滑膜肉瘤細(xì)胞 SW982 [SW-982]
人結(jié)腸腺癌細(xì)胞 SW1116
人腎上腺皮質(zhì)小細(xì)胞癌細(xì)胞 SW-13
人腎上腺皮質(zhì)小細(xì)胞癌細(xì)胞 SW1353
人胰腺癌細(xì)胞 SW1990
人結(jié)腸腺癌細(xì)胞 SW480
人甲狀腺癌細(xì)胞 SW579
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 SW620
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞+GFP SW620+GFP
142140210 SW620/5FU
人膀胱移行細(xì)胞癌 SW780
人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞 T24
人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞 T47D
人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 T98G
人食管癌細(xì)胞 TE-1
人食管癌細(xì)胞 TE-12
人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞 thp-1
人腦膠質(zhì)瘤 TJ905
人乳頭狀甲狀腺癌細(xì)胞株 TPC-1
人甲狀腺癌細(xì)胞 TT
人喉癌細(xì)胞 TU212
人喉癌細(xì)胞 TU-138
人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 U118MG(U-118MG)
人成骨肉瘤細(xì)胞 U-2 OS
人類(lèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞 U251 MG (KO)
人類(lèi)星形膠質(zhì)瘤耐替莫唑胺細(xì)胞 U251 MG/TMZ
人類(lèi)星形膠質(zhì)瘤耐替莫唑胺細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 U251 MG/TMZ+LUC(3000)
人骨髓瘤細(xì)胞 U266
人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 U87MG
人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤+RFP U87MG+RFP
人淋巴瘤細(xì)胞 U-937
人膀胱移行細(xì)胞癌 UM-UC-3
人前列腺癌細(xì)胞 VCAP
人視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞 WERI-RB-1
人黑素瘤細(xì)胞 WM-115
人正常前列腺基質(zhì)永生化細(xì)胞 WPMY-1
人正常肝細(xì)胞 WRL68
云南宣威人肺腺癌細(xì)胞系+GFP XWLC-05+GFP
人膽囊癌細(xì)胞系 ZJU-0430
人膽囊癌細(xì)胞系熒光素酶標(biāo)記 ZJU-0430+LUC
人乳腺癌細(xì)胞 ZR-75-1
ARPE-19人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞
巨噬細(xì)胞屬免疫細(xì)胞,有多種功能,是研究細(xì)胞吞噬、細(xì)胞免疫和分子免疫學(xué)的 重要對(duì)象。巨噬細(xì)胞容易獲得,便于培養(yǎng),并可進(jìn)行純化。巨噬細(xì)胞屬不繁殖細(xì) 胞群,在條件適宜下可生活 2-3 周,多用做原代培養(yǎng),難以長(zhǎng)期生存。
巨噬細(xì)胞也建有無(wú)限細(xì)胞系,大多來(lái)自小鼠,如 P331、S774A.1、RAW309Cr.l 等,均獲惡性,培養(yǎng)中呈巨噬細(xì)胞形態(tài)和吞噬功能,易于傳代和瓶壁分離,但難 以建株。
培養(yǎng)巨噬細(xì)胞可用各樣方法和各種來(lái)源來(lái)獲取細(xì)胞, 以小鼠腹腔取材法最為實(shí)用, 其法如下:1、實(shí)驗(yàn)前三天,向小鼠腹腔內(nèi)注入無(wú)菌硫羥乙酸肉湯 lml(勿注入腸內(nèi)!,以 ) 刺流產(chǎn)生大量的巨噬細(xì)胞。
2、引頸處死小鼠。
3、手提鼠尾將其全浸入 70%乙醇中 3-5 秒。
4、置動(dòng)物于解剖臺(tái),用針頭固定四肢,持鑷撕開(kāi)腹部皮膚,但勿傷及腹膜壁, 把皮膚拉向上下兩側(cè),暴露出腹膜壁。
5、用 70%酒精擦洗腹膜壁,注射器吸 10ml Eagle 液注入腹腔中,同時(shí)用手指從 兩側(cè)壓揉腹膜壁,使液體在腹腔內(nèi)流動(dòng)。
6、 用針頭輕挑起腹壁并微傾向一側(cè). 使腹腔中液體集中于針頭下吸取入針管內(nèi)。
7、小心拔出針頭,把液體注入離心管。
8、4℃下 250g 離心 10 分鐘后,去上清,加 10ml Eagle 培養(yǎng)基。
9、計(jì)數(shù)細(xì)胞。每只鼠可產(chǎn)生 20 一 30×106 細(xì)胞,其中 90%為巨噬細(xì)胞。
10、以 3×105 個(gè)貼附細(xì)胞/平方厘米接種。
11、接種數(shù)小時(shí)后,除去培養(yǎng)液,可去除其它白細(xì)胞,純化培養(yǎng)細(xì)胞,用 Eagle 液沖洗 1 一 2 次,再加新 Eagle 培養(yǎng)液置 CO2 溫箱中。
豬腎細(xì)胞系 LLC-PK-1 DMEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)
豬腎細(xì)胞系 PK-13 DMEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)
豬鼻甲黏膜成纖維細(xì)胞 PT-K75 DMEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)
豬髖動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 PIEC 1640+10%FBS+1%P/S 貼壁生長(zhǎng)