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小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶,CT26+luc

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更新時(shí)間:2023-12-22 12:57:15瀏覽次數(shù):1581次

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小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶,CT26+luc
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小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶CT26+luc

細(xì)胞介紹:

CT26細(xì)胞是被N-亞硝基-N-甲基脲烷(NNMU)誘導(dǎo)得到的未分化的小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞,該細(xì)胞的一個(gè)克隆形成的細(xì)胞系被命名為CT26.WTCT26.WT被逆轉(zhuǎn)錄病毒載體LXSN穩(wěn)定轉(zhuǎn)化形成了一個(gè)致死性的亞克隆CT26.CL25,這一病毒載體含有lacZ基因、編碼腫瘤相關(guān)抗原(TAA)和beta半乳糖苷酶。CT26.WTCT26.CL25細(xì)胞在小鼠中生長速度和致死率都很相似,不同的是CT26.CL25細(xì)胞可以表達(dá)腫瘤相關(guān)抗原和beta半乳糖苷酶,因此這兩株細(xì)胞可以聯(lián)合用于免疫和宿主免疫反應(yīng)的研究。該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。

細(xì)胞特性

1) 來源:小鼠結(jié)腸

2) 形態(tài)成纖維細(xì)胞樣,貼壁生長

3) 含量:>1x106  細(xì)胞數(shù)

4) 規(guī)格:T25或者1mL凍存管包裝

5)  用途:僅供科研使用。

細(xì)胞篩選:

該細(xì)胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Luc的細(xì)胞,隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加,其Luc熒光強(qiáng)度會(huì)逐漸減弱。若實(shí)驗(yàn)要求需要維持熒光強(qiáng)度,可以加入嘌呤霉素進(jìn)行再次篩選。 建議收到細(xì)胞后至少傳3代,凍存留種后再進(jìn)行篩選。

初次進(jìn)行細(xì)胞篩選時(shí),建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的*培養(yǎng)基維持培養(yǎng),若無細(xì)胞漂浮或者漂浮較少,即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的*培養(yǎng)基繼續(xù)篩選,以此類推,至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中,漂浮細(xì)胞大于60%,則停止篩選,換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),至細(xì)胞密度約80%,可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進(jìn)行篩選。當(dāng)加入5ug/ml嘌呤霉素時(shí)細(xì)胞正常增殖,可停止篩選,用不含藥*培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

運(yùn)輸和保存:干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞:(11mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。(2T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

細(xì)胞接收后的處理:

1)收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2)請?jiān)?/span>45X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的*培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上,可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中,若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。

4備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶12傳代 。

 

一.培養(yǎng)基培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%

2) 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

二.細(xì)胞處理

1) 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇::

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL*培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA培養(yǎng)瓶中T251-2mLT752-3mL,置于37培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。 

3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按12的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行

3)細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例;

1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶,CT26+luc 

注意事項(xiàng):

1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意:凍存管浸沒在液氮中會(huì)泄漏,并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí),液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子,從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。

★ 我們需要知道都有哪些種類的牛血清和它們的用途:

 

1、透析血清

分子量小于10,000的分子如氨基酸、葡萄糖、鹽離子和未結(jié)合的蛋白均被移除。透析血清主要用在進(jìn)行營養(yǎng)成分優(yōu)化和標(biāo)定特定成分進(jìn)行研究的實(shí)驗(yàn)中。

 

2、碳吸附血清

使用活性和右旋糖苷去除血清中的親脂類(lipophilic)物質(zhì),如某些激素、細(xì)胞因子、生長因子等,去除作用對分子量大小并無區(qū)分。碳吸附胎牛血清常用于體外培養(yǎng)研究驗(yàn)證激素的作用效果。

3、去外泌體血清

適用于收集細(xì)胞分泌的外泌體時(shí)使用。

 

4、低IgG血清

用于研究抗體、病毒和病毒反應(yīng)、細(xì)胞表面抗原表位。

 

5、四環(huán)素血清

應(yīng)用于使用敏感四環(huán)素誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)(Tet-on, Tet-off),以及其它對四環(huán)素敏感的實(shí)驗(yàn)中。

 

6、IR (輻照)

鈷60伽馬輻照劑量在3.5Mrad. 通過直接與間接作用將生物大分子(如核酸)鍵結(jié)破壞,人畜用藥物/疫苗,及對微生物負(fù)荷(Bioburden)要求水平的實(shí)驗(yàn)。

 

7、HI (熱滅活)處理血清

56℃, 30Min, 破壞補(bǔ)體,確保細(xì)胞與抗體結(jié)合不會(huì)發(fā)生裂解。

 

8、胚胎干細(xì)胞(ES)專用血清

是從多個(gè)批次的胎牛血清篩選出特定批號,適用于人及小鼠胚胎干細(xì)胞、成體干細(xì)胞及原代細(xì)胞長期培養(yǎng)。

 

9、間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)專用血清

從多個(gè)批次的胎牛血清篩選出特定批號,經(jīng)過骨髓,脂肪組織及臍帶來源的間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞活性嚴(yán)格測試,通過傳代及分化比例測試。

其他動(dòng)物血清

10、馬血清

10%馬血清可代替FBS用于支持SRBC的體外抗體應(yīng)答, 常與牛血清結(jié)合或單獨(dú)作為哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的補(bǔ)充培養(yǎng)基。

 

11、豬血清

豬血清在染色體研究中表現(xiàn)非常出色,可用于淋巴細(xì)胞培養(yǎng), 疫苗生產(chǎn)(生產(chǎn)支原體), 中和脂質(zhì)體包裹的腺相關(guān)病毒(AAV), 用于誘導(dǎo)大鼠肝纖維化, 作為酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)中的標(biāo)準(zhǔn)陰性參考。

 

12、兔血清

正常兔血清可作為免疫分析的阻斷劑和對照。在免疫組織化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)方面,各種研究均采用20%或1:200稀釋兔血清作為阻斷劑。

 

13、羊血清

用于生物醫(yī)學(xué)研究的大多數(shù)細(xì)胞系和原代培養(yǎng)物上,F(xiàn)BS的合適替代物,病毒分離和鑒定,病毒學(xué)研究。

用作魚類細(xì)胞培養(yǎng)的有效NBCS替代物。

可成功地代替胎牛血清在生長培養(yǎng)基中長期用于環(huán)孢蘑菇的體外繁殖。

WINSERA®胎牛血清

貨號

規(guī)格

庫存狀態(tài)

優(yōu)級

FBS500-WS-002

500ML

現(xiàn)貨

特級

FBS500-WP-002

500ML

現(xiàn)貨

ES級別

FBS500-WE-002

500ML

現(xiàn)貨

無外泌體血清

FBS050-EXO

50ML

現(xiàn)貨

 


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