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人結(jié)直腸癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 LOVO+LUC

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更新時間:2023-12-22 13:12:01瀏覽次數(shù):1615次

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人結(jié)直腸癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 LOVO+LUC

細(xì)胞代號:LOVO+LUC

細(xì)胞培養(yǎng)條件:F12K+10%FBS+1%P/S

細(xì)胞生長形態(tài):貼壁生長

人結(jié)直腸癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 LOVO+LUC

細(xì)胞代號:LOVO+LUC

細(xì)胞培養(yǎng)條件:F12K+10%FBS+1%P/S   

細(xì)胞生長形態(tài):貼壁生長

培養(yǎng)基中氣泡對細(xì)胞貼壁的影響

在培養(yǎng)細(xì)胞時,普通手動移液器加細(xì)胞液過程可能會由于操作速度過快造成氣泡產(chǎn)生,氣泡會破壞細(xì)胞附著,導(dǎo)致細(xì)胞培育的效果不佳,產(chǎn)生誤差,所以在移液時需要進(jìn)行練習(xí),以避免氣泡生成,同時注意消除吸頭內(nèi)的空氣,最好是使用外置活塞式分液器,因?yàn)橥庵没钊椒忠浩骺梢栽诓划a(chǎn)生氣泡的情況下轉(zhuǎn)移易氣泡液體。

正在培養(yǎng)中的細(xì)胞應(yīng)每隔一定時間觀察一次,觀察的內(nèi)容包括細(xì)胞是否生長良好,形態(tài)是否正常,有無污染,細(xì)胞進(jìn)入培養(yǎng)器皿后,立即放入培養(yǎng)箱中,使細(xì)胞盡早進(jìn)入生長狀態(tài)。

超凈工作臺內(nèi)的無菌工作規(guī)范

細(xì)胞培養(yǎng)是一項(xiàng)十分嚴(yán)謹(jǐn)且專業(yè)的實(shí)驗(yàn)過程,超凈工作臺原理是在特定的空間內(nèi),室內(nèi)空氣經(jīng)預(yù)過濾器初濾,由小型離心風(fēng)機(jī)壓入靜壓箱,再經(jīng)空氣高效過濾器二級過濾,從空氣高效過濾器出風(fēng)面吹出的潔凈氣流具有一定的、均勻的斷面風(fēng)速,可以排除工作區(qū)原來的空氣,將塵埃顆粒和生物顆粒帶走,以形成無菌的高潔凈的工作環(huán)境。所以實(shí)驗(yàn)一般在超凈無菌工作臺上進(jìn)行,所以超凈工作臺一定要保持整潔衛(wèi)生規(guī)范。超凈工作臺上應(yīng)該采用從左到右,從潔凈的實(shí)驗(yàn)空間到放置實(shí)驗(yàn)廢品的臟污空間擺放。

如果在實(shí)驗(yàn)過程中隨意擺放過多實(shí)驗(yàn)器材,容易阻擋超凈工作臺的氣道流通,形成湍流,容易使污染物進(jìn)入容器,讓細(xì)胞受到污染。

正確管理CO?培養(yǎng)箱

CO?培養(yǎng)箱是存儲細(xì)胞和培養(yǎng)細(xì)胞生長的實(shí)驗(yàn)器材,實(shí)驗(yàn)人員在實(shí)驗(yàn)過程中難以避免需要擺放細(xì)胞培養(yǎng)皿進(jìn)CO?培養(yǎng)箱,這個時候就需要注意,實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)該避免頻繁的開關(guān)CO?培養(yǎng)箱,讓箱內(nèi)的實(shí)驗(yàn)環(huán)境受到影響無法及時恢復(fù),導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)生長受到干擾。同時,在CO?培養(yǎng)箱內(nèi)擺放的樣品需要注意規(guī)范好擺放的位置并做好正確的標(biāo)記,做到培養(yǎng)箱門快開快關(guān),一般的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)箱往往多人合用,建議合用的培養(yǎng)箱配置內(nèi)外門,大化程度減少開關(guān)門對培養(yǎng)箱環(huán)境的影響,避免實(shí)驗(yàn)樣品混淆和交叉污染的風(fēng)險。

CO?培養(yǎng)箱的常規(guī)維護(hù)和消毒

CO?培養(yǎng)箱需要保持濕潤的環(huán)境,所以需要定期(1-2周)將盛液盤整體移出,將殘留的水清空,用70%的酒精或異丙醇溶液擦拭消毒,待干燥后添加無菌蒸餾水,再放回培養(yǎng)箱內(nèi)。

CO?培養(yǎng)箱一般需要1個月進(jìn)行一次消毒清理,實(shí)驗(yàn)人員需要按規(guī)范拆除培養(yǎng)箱的擱板、擱架及水盤,將酒精噴灑于布上,再進(jìn)行腔體的清潔,培養(yǎng)箱內(nèi)盡量避免死角的存在,擦拭腔體內(nèi)每個位置,再將移除的配件擦拭清潔后,安裝到位。

目前自動化設(shè)備已代替人工復(fù)雜操作,可通過運(yùn)行高溫消毒程序,有效避免污染發(fā)生。


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人結(jié)直腸癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 LOVO+LUC

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小鼠黑色素瘤細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 B16-F10+LUC

小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 CT26+LUC

小鼠膠質(zhì)細(xì)胞瘤熒光素酶標(biāo)記 GL-261+luc

小鼠肝癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 HEPA1-6+LUC

小鼠卵巢上皮癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 ID8+LUC

小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 K7M2WT(K7M2-WT)-LUC

小鼠肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 LLC+LUC

小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 MC38+LUC

小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 neuro-2a+luc

小鼠胰腺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 panc02+LUC

小鼠前列腺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 RM-1+LUC

大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞綠色熒光標(biāo)記 C6+LUC

細(xì)胞復(fù)蘇

細(xì)胞復(fù)蘇和凍存講究“慢凍快溶",復(fù)蘇時一定要將凍存在液氮或-80℃中凝固的細(xì)胞凍存液快速融化至37℃,使胞外凍存時的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶,對細(xì)胞造成損害。

復(fù)蘇準(zhǔn)備

?打開水浴鍋加熱至37℃。

? 超凈臺上放好離心管(一般15ml的),細(xì)胞培養(yǎng)瓶,移液管,紫外滅菌至少20至30分鐘,吹風(fēng)5至10分鐘除去臭氧。

?37℃預(yù)熱好要復(fù)蘇細(xì)胞的培養(yǎng)液,也可以不用預(yù)熱培養(yǎng)液,根據(jù)細(xì)胞情況選擇。

?向離心管中加約5至10ml培養(yǎng)液,從液氮罐或-80℃中取出凍存細(xì)胞,立即將凍存管放入37℃水浴中并輕輕搖動,待融化后(約2min即可)立即將解凍的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至含培養(yǎng)液的離心管中,800-1000rpm下離心5min,棄上清,加適量*培養(yǎng)液輕輕吹打重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)移至細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,輕晃使瓶底液體分散均勻,標(biāo)好細(xì)胞名稱、代數(shù)、復(fù)蘇日期,顯微鏡下觀察后放入37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中。一般貼壁細(xì)胞過夜即可貼壁,換液和傳代時間根據(jù)不同細(xì)胞生長情況而定。

細(xì)胞復(fù)蘇注意事項(xiàng)

?復(fù)蘇時動作要快,盡量減少胞內(nèi)形成冰晶,影響復(fù)蘇后細(xì)胞活率。

? 融化時盡量不要碰到管口,以免容易造成污染。

?若一次性需要復(fù)蘇細(xì)胞很多,可以分批水浴解凍,防止傳熱不佳使得細(xì)胞融化時間延長。

?若需要同時復(fù)蘇好幾種細(xì)胞,提前在離心管和培養(yǎng)瓶上做好標(biāo)記,或記住自己擺放的位置,不要弄混亂。



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