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產(chǎn)品名稱:通過(guò)STR鑒定人肝癌細(xì)胞SMMC7721
細(xì)胞規(guī)格:1-3×10^6細(xì)胞量
庫(kù)存狀態(tài):現(xiàn)貨
培養(yǎng)液:DMEM+10% FBS
運(yùn)輸方式:常溫順豐運(yùn)輸和干冰順豐運(yùn)輸
貨 期:復(fù)蘇細(xì)胞需要1-2周,凍存細(xì)胞的需要3-5天(特殊情況會(huì)有說(shuō)明)
質(zhì) 控:無(wú)支原體、無(wú)污染、符合標(biāo)準(zhǔn)
研究范圍:僅供科研使用
通過(guò)STR鑒定人肝癌細(xì)胞SMMC7721 ,我司主要經(jīng)營(yíng)產(chǎn)品是國(guó)內(nèi)傳代細(xì)胞和細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)的生物試劑。GIBCO、HyClone、NTC、SIGMA、 BI 、GEMINI、PAN和SBI無(wú)外泌體血清等高品質(zhì)血清。常規(guī)液體培養(yǎng)基、胰酶、雙抗、無(wú)血清凍存液、日本三菱產(chǎn)品、ELISA 試劑盒等產(chǎn)品。售后完善,我們以飽滿的熱情歡迎新老客戶選購(gòu)!
在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)這樣或那樣的問(wèn)題,這些問(wèn)題從細(xì)胞生長(zhǎng)角度來(lái)說(shuō),針對(duì)細(xì)胞不貼壁、生長(zhǎng)緩慢、生長(zhǎng)不好,甚至死亡的原因,我們做以下分析并提出相對(duì)應(yīng)的解決方法。
一、培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁
可能原因:
●胰蛋白酶消化過(guò)度 ;
●支原體污染 ;
●培養(yǎng)基pH值過(guò)堿(NaHCO3分解);
●細(xì)胞老化 ;
●接種細(xì)胞起始濃度太低或太高 。
解決方法:
●縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度;
●分離培養(yǎng)物,檢測(cè)支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物;
●使用無(wú)菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無(wú)菌CO2 ;
●啟用新的保種細(xì)胞 ;
●調(diào)節(jié)zui佳接種細(xì)胞濃度。
二、懸浮細(xì)胞成簇
可能原因:
●培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子 ;
●支原體污染;
●蛋白酶過(guò)度消化使得細(xì)胞裂解;
●DNA污染 。
解決方法:
●用無(wú)鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞,輕巧吹吸細(xì)胞獲得單細(xì)胞懸液;
●分離培養(yǎng)物,檢測(cè)支原體;
●用DNaseI處理細(xì)胞。
三、培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢
可能原因:
●由于更換不同培養(yǎng)液或血清;
●培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長(zhǎng)必需成分如谷氨酰胺或生長(zhǎng)因子耗盡或缺乏或已被破壞;
●培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染;
●試劑保存不當(dāng);
●接種細(xì)胞起始濃度太低;
●細(xì)胞已老化;
●支原體污染 。
解決方法:
●比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分,比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn),讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液;
●換入新鮮配置培養(yǎng)液,或補(bǔ)加谷氨酰胺及生長(zhǎng)因子;
●用無(wú)抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng),如發(fā)現(xiàn)污染,丟棄培養(yǎng)物;
●血清需保存在-10到-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清*培養(yǎng)液在2-8℃保存,需在1周內(nèi)用完;
●增加接種細(xì)胞起始濃度;
●換用新的保種細(xì)胞;
●分離培養(yǎng)物,檢測(cè)支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物。
四、培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)不好
可能原因:
●細(xì)胞本身的狀態(tài)
細(xì)胞傳代次數(shù)多,細(xì)胞老化;
細(xì)胞的接種量:接種量過(guò)低,細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢;
細(xì)胞傳代時(shí)間過(guò)晚:細(xì)胞中毒,影響傳代后的細(xì)胞生長(zhǎng);
胰酶消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短:時(shí)間過(guò)長(zhǎng),細(xì)胞死亡;時(shí)間過(guò)短,細(xì)胞未*分離而成團(tuán),細(xì)胞死亡;
細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇:慢凍速融。
●污染
支原體污染;
霉菌污染。
●培養(yǎng)基或血清
更換血清或培養(yǎng)基之前未進(jìn)行驗(yàn)證;
選擇的培養(yǎng)基是否合適;
培養(yǎng)基配制是否準(zhǔn)確無(wú)誤。
●培養(yǎng)環(huán)境
CO2供應(yīng)是否正常;
培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確。
解決方法:
根據(jù)以上四個(gè)方面的可能原因,做出針對(duì)性的解決方案
●注意細(xì)胞的本身狀態(tài):如傳代次數(shù)、接種量等;
●避免產(chǎn)生污染(用正規(guī)、合法、可溯源的血清);
●要用合適的血清或培養(yǎng)基,zui好經(jīng)過(guò)驗(yàn)證;
●注意實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境。
五、培養(yǎng)細(xì)胞死亡
可能原因:
●培養(yǎng)箱內(nèi)無(wú)CO2;
●培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動(dòng)太大;
●細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過(guò)程中損傷;
●培養(yǎng)液滲透壓不正確;
●培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積 。
解決方法:
●檢測(cè)培養(yǎng)箱內(nèi)CO2;
●檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度;
●取新的保存細(xì)胞種;
●檢測(cè)培養(yǎng)液滲透壓;
●換入新鮮培養(yǎng)液。
細(xì)胞培養(yǎng),尤其是細(xì)胞系的培養(yǎng),就細(xì)胞消化而言,多做、善于總結(jié),就可以把細(xì)胞養(yǎng)的越來(lái)越好。
絕大部分細(xì)胞消化只要用胰酶潤(rùn)洗一遍即可:
吸去胰酶后,殘留的那些無(wú)法計(jì)算體積的附著在細(xì)胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足夠消化細(xì)胞(絕大部分1min不到)。對(duì)于這些細(xì)胞原則上不要用胰酶孵育細(xì)胞,連續(xù)這樣傳代,對(duì)細(xì)胞傷害很大。簡(jiǎn)單的程序是PBS潤(rùn)洗吸去,胰酶潤(rùn)洗吸去,然后37度消化。
怎樣算是消化好了呢?
不需要把細(xì)胞全部消化成間隔分布很離散的單個(gè)圓形才算消化好了,一般你肉眼觀察貼壁細(xì)胞層,只要能移動(dòng)了,多半呈沙壯移動(dòng),其實(shí)已經(jīng)可以了。
一般能移動(dòng)了,說(shuō)明細(xì)胞與培養(yǎng)基質(zhì)材料的附著已經(jīng)消失了,細(xì)胞之間的附著也已經(jīng)消失了,細(xì)胞已經(jīng)獨(dú)立分布了(雖然沒(méi)有呈現(xiàn)很廣的離散分布)。這個(gè)時(shí)候應(yīng)該停止消化,不要等到看到鏡下所有細(xì)胞都分離得非常好,間隙很大,才停止。
細(xì)胞就是*成單個(gè)細(xì)胞懸液,之后在貼壁的過(guò)程中仍然會(huì)聚集,這個(gè)是貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,尤其是腫瘤細(xì)胞的一個(gè)特性,你可以嘗試,準(zhǔn)備*的單個(gè)細(xì)胞懸液,貼壁后觀察細(xì)胞,仍然是幾個(gè)幾個(gè)細(xì)胞聚集在一起。
一些懸浮培養(yǎng)細(xì)胞也是如此,容易聚集,不要過(guò)幾個(gè)小時(shí)就拿出來(lái)吹打成單細(xì)胞懸液。細(xì)胞只要能從基質(zhì)上脫離下來(lái),即使是成片的(比如Calu-3細(xì)胞),吹打不超過(guò)20次(一般10次即可),成小規(guī)模聚集(10個(gè)細(xì)胞左右)是正常的,不要再去延長(zhǎng)消化時(shí)間,等待單細(xì)胞懸液出現(xiàn)。
比較難消化的細(xì)胞:
潤(rùn)洗方法5min還不能消化,以結(jié)腸癌細(xì)胞為例,比如HCT15、LS411和KM12細(xì)胞,胰酶消化,一般10 cm 培養(yǎng)皿,一次多加入300ul-500ul就足夠了。即使這樣難消化的細(xì)胞,一般不超過(guò)5min,即可見(jiàn)細(xì)胞成片移動(dòng),就應(yīng)該停止消化。一些正常細(xì)胞也會(huì)有難消化的時(shí)候,比如tsDC細(xì)胞,用胰酶孵育,3min左右即可看到成片沙狀移動(dòng)。
常規(guī)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn),受消化影響不是很大:
如果不用胰酶去孵育而使用潤(rùn)洗的方法消化的話(難消化細(xì)胞例外)。但少數(shù)實(shí)驗(yàn),比如病毒包裝,對(duì)細(xì)胞代數(shù),對(duì)細(xì)胞狀態(tài)要求*。這個(gè)時(shí)候,胰酶消化,就是潤(rùn)洗,都會(huì)對(duì)細(xì)胞包裝病毒的能力有影響,傳代次數(shù)一多,細(xì)胞包裝能力就會(huì)逐漸下降。這個(gè)時(shí)候都不用胰酶消化,用一些鹽溶液(不是EDTA液)即可。這些鹽溶液通過(guò)影響細(xì)胞外基質(zhì)相關(guān)酶的活性,來(lái)使得細(xì)胞脫離基質(zhì)附著表面,但不切割任何蛋白。
EDTA的作用:
許多人不用胰酶,只用EDTA,或者用胰酶/EDTA聯(lián)合作用。這里要明白,胰酶切割細(xì)胞外基質(zhì)的一些負(fù)責(zé)粘連和附著的蛋白,而EDTA通過(guò)螯合Ca離子,作用于整聯(lián)蛋白的活性,所以EDTA的作用更加溫和。有的人在胰酶里添加一些EDTA,或者對(duì)付特別難消化的細(xì)胞,添加多一些EDTA,就是這個(gè)道理。一般不要試圖延長(zhǎng)消化時(shí)間(如果10min還消化不*的話),而應(yīng)該想其它辦法。
PBS洗滌:
消化之前用PBS洗滌,是常見(jiàn)的操作,因?yàn)檠逯泻幸种埔让傅牡鞍住?duì)于一些難消化細(xì)胞,可以配制不含Ca,Mg離子的PBS,因?yàn)檫@些離子也會(huì)抑制胰酶的活性。但對(duì)于絕大部分細(xì)胞用胰酶或者EDTA溶液潤(rùn)洗即可消化,不需要配制不含Ca,Mg離子的溶液。
每段時(shí)間定期對(duì)細(xì)胞房、培養(yǎng)箱&水盤(pán)、水浴鍋、廢液桶等容易染菌的個(gè)角落細(xì)菌、真菌等微生物的清除,每次操作完都整理好細(xì)胞房,帶好手套、口罩、鞋套,防止人為因素污染。
MCF7/Taxol人乳腺癌紫杉醇耐藥株
HCT8/5-fu 人回腸直腸腺癌細(xì)胞五氟尿嘧啶耐藥株
LOVO/5-FU 人結(jié)腸癌細(xì)胞五氟尿嘧啶耐藥株
HCT116/L人結(jié)腸癌奧沙利鉑耐藥細(xì)胞
HL60/ADR人早幼粒急性白血病細(xì)胞耐阿霉素株
PC9GR(PC9R)人肺癌細(xì)胞耐吉非替尼
LOVO/ADR人結(jié)腸癌細(xì)胞阿霉素耐藥株
HNE1/DDP人鼻咽癌細(xì)胞順鉑耐藥株
SGC7901/5-fu人胃癌細(xì)胞五氟尿嘧啶耐藥株
A549/DDP人肺癌細(xì)胞順鉑耐藥株
MCF-7/DDP人乳腺癌細(xì)胞順鉑耐藥株
A549/ADR人肺癌細(xì)胞阿霉素耐藥株
SGC7901/DDP人胃癌細(xì)胞順鉑耐藥株
SKOV3/DDP人卵巢癌細(xì)胞順鉑耐藥株
HELA/DDP人宮頸癌耐順鉑細(xì)胞株
3T3-L1 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞
NIH/3T3小鼠胚胎細(xì)胞
Raw264.7小鼠單核巨噬白血病細(xì)胞
B16-F10小鼠黑色素瘤高轉(zhuǎn)細(xì)胞
B16 小鼠黑色素瘤細(xì)胞
CT26.WT小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞
SV40 MES 13小鼠腎小球系膜細(xì)胞
F9 小鼠畸胎瘤細(xì)胞
MLE-12 小鼠肺泡上皮細(xì)胞
Sp2/0-Ag14 小鼠骨髓瘤細(xì)胞
BV2 小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞
DC2.4小鼠樹(shù)突狀細(xì)胞
U14 小鼠子宮頸癌細(xì)胞
M-NFS-60小鼠骨髓性白血病細(xì)胞
mMSC小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞
HL-1小鼠心肌細(xì)胞
TM3 小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞
k7m2.wt小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞
mc3t3 e1小鼠胚胎成骨細(xì)胞前體細(xì)胞
hepa1-6 小鼠肝癌細(xì)胞
SP2/0小鼠骨髓瘤細(xì)胞
HT22小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞系
MC38小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞
mpc5小鼠足細(xì)胞
4T1 小鼠乳腺癌細(xì)胞
ANA-1小鼠巨噬細(xì)胞
TM4 小鼠睪丸支持細(xì)胞
STO 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞
bend.3 小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞
J774A.1小鼠單核巨噬細(xì)胞
H9C2 大鼠心肌細(xì)胞
PC-12(低分化) 大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(低分化)
PC-12(高分化) 大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(高分化)
AR42J 大鼠胰腺外分泌細(xì)胞
IEC-6 大鼠小腸引窩上皮細(xì)胞
RT4-D6P2T 大鼠神經(jīng)鞘瘤細(xì)胞
INS-1 大鼠胰島細(xì)胞瘤細(xì)胞
NRK-52E 大鼠腎小管導(dǎo)管上皮細(xì)胞
BHK-21 倉(cāng)鼠腎成纖維細(xì)胞
PK-15 豬腎細(xì)胞
Duckembyro 鴨胚胎成纖維細(xì)胞
vero 綠猴腎細(xì)胞
Hep3B人肝癌細(xì)胞
HPAC人胰腺癌細(xì)胞
HT-1376 人膀胱癌細(xì)胞
JAR 人胎盤(pán)絨毛癌細(xì)胞
KNS-89 人腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞
雙抗 15140-122、SV30010
胰酶 25200-056、SH30042.01
GIBCO 胰酶 25200-072
DMEM高糖培養(yǎng)基 C11995500BT
DMEM低糖培養(yǎng)基 C11885500BT
PBS C10010500BT
1640培養(yǎng)基 C11875500BT
DMEM/F12 C11330500BT
MEM培養(yǎng)基 C11095500BT
α-MEM C12571500BT
DMEM低糖 SH30021.01
DMEM高糖 SH30022.01、SH30243.01
DMEM/F-12 1:1 SH30023.01
MEM/EBSS SH30024.01
PBS緩沖液 SH30256.01
α-MEM SH30265.01
RPMI-1640 SH30809.01
DPBS SH30028.02
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